病毒感染目的细胞感染不上或效率低?
和以下几个因素有关:
1、病毒活性:解冻病毒一定要在冰上进行,尽量避免反复冻融, -80 ℃ 保存半年以上需要重新测滴度;
2、目的细胞:最好预实验测试过,看病毒载体是否合适感染目的细胞。一些难感染的细胞,如悬浮细胞,原代细胞等,或者动物实验适合用腺病毒或AAV;
3、MOI值:一般来说MOI都是要用梯度法来摸索的,同的病毒感染不同的细胞的MOI值也不一样,如果感染细胞所用的病毒量不够的话,感染效率肯定不好;需要确认MOI计算及细胞计数的准确性。
4、感染时间:慢病毒一般在感染后24h换液,感染后换液太早会导致感染效率下降;感染后换液太晚,则对细胞的损伤太大,效率也不高。感染后48h开始观察荧光,由于慢病毒的表达时间较长,有的72h,120h才能看到荧光。
5、其他:是否加入 polybrene 以及荧光显微镜的使用等因素有关