ELISA检测中的OD值您了解多少?   “OD值”这个概念想必做实验的各位小伙伴们都不陌生，从判断提取核酸的质量及浓度，到BCA蛋白定量进行蛋白定量，又或者是ELISA实验检测目的蛋白含量，这些常用的基础实验都需要检测样品的“OD值”，但是“OD值”到底是个什么东西，我们在测量“OD值”的时候又有哪些需要注意的问题呢?   OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。   了解了“OD值”是什么之后，接下来我们再看看在不同的实验中测量“OD值”有哪些需要注意的。   需要注意的就是测量时的光波长。在介绍“OD值”概念时提到，吸光度利用的是物质特有的吸收光谱，实际操作中我们需要注意的关键的也是这一点，不同物质的吸收光谱不同，大吸收峰的波长也不同，为了达到好的测量效果，一般来讲，我们需要在待测物质的大吸收波长处来检测其“OD值”。例如，核酸在260nm波长处光吸收大，而蛋白和酚类物质则在280nm波长处光吸收大;BCA法检测蛋白含量时，显色反应后，溶液由浅绿色变为紫色，此时在560nm处有大光吸收值;TMB法显色的ELISA实验，在加入终止液后溶液由蓝色变为黄色，在450nm处有大光吸收。   除了吸收波长，一些实验还需要设置校正波长，校正波长往往远离大吸收波长，作为本底吸收，排除由于气泡、灰尘等其他系统误差造成的“OD值”偏差。根据测得的“OD值”，进行双波长校正，可以有效的减少系统误差造成的影响。   对于测量得到的待测样本“OD值”还需要进行换算才可以得到终的浓度，有很多小伙伴往往在这一步出现错误，功亏一篑。需要注意的地方也比较简单，就是根据对应试剂盒的说明书，采用推荐的曲线拟合方式进行拟合，拟合后需要看一下拟合曲线的R2值，越接近1证明曲线拟合度越高，结果越可信。如果R2值较低，则需要检查是否出现标准品稀释问题或实验操作出现失误。   ELISA实验的显色过程都会受反应时间及温度等条件影响的，需要根据实验情况及时终止实验进行读数，所以做实验时尽量不要走开哦!   上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  ELISA实验之阴阳性对照的选择   做ELSIA实验时，会遇到很多问题，ELISA实验中常见问题的就是阴阳性对照应该如何选择，今天古朵生物技术小编就给大家具体介绍一下。   1、如何选择合适的阳性对照?   阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致，一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，加入一定量的待检物质。比如，以人血清为标本的测定，阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品。   2、如何选择合适的阴性对照?   阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致，先检测确定其中不含待检物质。比如，检测人血清标本时，阴性对照应该选择正常人血清。检测免疫动物血清中抗体效价时，阴性对照应该选择该动物的免疫前血清。   ELISA上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  如何操作的ELISA实验？   在做实验前首先需要了解该实验的杂乱性，虽然ELISA试剂盒操作简略，但过程多而杂乱，下面教您如何操作的ELISA实验?实验看似很无聊，其实在重要的洗刷过程中，如果未结合残留在微孔板中，那么它会添加布景噪音。如有必要，可添加洗刷液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果布景过高，而您置疑洗刷不行时，可以测验添加洗刷次数。   洗板方法有手艺与主动两种，在加样过程中留意：吸嘴的洁净与否和吸量的准确性，直接影响检测成果。因为吸嘴结构特别，导致清洗困难，加大了穿插污染的时机。主张用一次性吸嘴。加样器也要常常清洗，定期校准。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不可溅出。   ELISA试剂盒标准有96T与48T两种，我公司所提供的高质量进口试剂盒供试验室研讨使用，需要在2-8℃温度中保存，有效期为半年，也就是6个月。   1. 浓洗刷液可能会有结晶分出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。   2. 严格按照说明书的操作进行，试验成果断定有必要以酶标仪读数为准。   3. 所有样品，洗刷液和各种废弃物都应按感染物处理。   ELISA试剂盒包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时刻，包被液的pH等应根据试验的特点和资料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置一个晚上，37℃中保温2小时被以为具有平等的包被效果。包被的恰当浓度随载体和包被物的性质可有很大的改变，每批资料需经过试验与酶结合物的浓度协调选定。   上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  猪ELISA试剂盒的检测步骤及常用途径    ELISA试剂盒 是一种广泛应用于生物学、医学和农业等领域的检测工具，可以快速、准确地检测样品中的特定分子或抗体。其中，猪ELISA试剂盒是专门用于检测猪体内某些分子或抗体的试剂盒。原理基于酶联免疫吸附实验(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)技术，通过将待测样品与特异性的识别分子(如抗体或抗原)结合后，再加入标记有酶的二抗或底物，以酶催化作用为桥梁，实现对待测物质的检测。   在猪ELISA试剂盒中，通常使用间接ELISA方法进行检测。首先，在ELISA板上涂覆具有抗原性的分子，再加入待测样品，样品中的特异性抗体与涂层上的分子相结合形成免疫复合物。接着，加入标记有酶的二抗，如荧光素过氧化物酶(HorseradishPeroxidase，HRP)或碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase，ALP)，并进行反应。后，在加入底物后，标记酶催化底物发生反应，形成信号物质，以此来检测待测样品中目标分子的含量。   猪ELISA试剂盒的步骤：   1.样品处理：将待测样品处理后加入ELISA板的孔中。   2.涂层抗体的加入：向每个孔中加入特异性涂层抗体，并在37℃下孵育一定时间，使其与样品中的目标分子结合。   3.二抗的加入：向每个孔中加入标记有酶的二抗，并在37℃下孵育一段时间，使其与结合到抗原上的抗体结合。   4.底物的加入：向每个孔中加入底物，使标记酶催化底物发生反应，并形成可见光信号。   5.读板：用ELISA板阅读器读取每个孔中的光密度值，根据标准曲线计算出待测样品中目标分子的含量。   可以广泛应用于动物免疫学、生物安全检测等领域。以下是一些常见的应用：   1.猪疾病检测：通过检测猪体内的特定抗体或抗原，实现对猪疾病的快速诊断和预防。   2.畜禽产品质量检测：可检测畜禽产品中的残留药物、激素和抗生素等残留物，确保食品安全。   猪ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  血清出现沉淀物后是否该继续使用?   血清中出现一些絮状、泥沙状等白色固体后，还能用吗，对实验的影响有多大?   血清中出现沉淀是正常的物理析出现象，是可放心使用吗？   1、细胞培养效果?   多项数据表明，血清析出少量蛋白质后，细胞培养效果并不会有明显的变化。   2、过滤去除沉淀?   如果出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。   一般说来，因为在血清生产时后来已经经过0.22μm及0.1μm滤芯过滤处理，并且按照现行版药典规定进行无菌检测，因此不推荐再过滤血清。   如非必要，在实验室中无需再过滤处理血清，以免操作不规范导致污染的发生。   3、沉淀or污染?   磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。   研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了;并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此就加确认是血清被污染了。于是，研究者就会花费多的时间和精力来和生产商确认，但确定血清没有被污染而只是沉淀。   为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。   关键词：胎牛血清,动物血清,小鼠血清   血清上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。 ...

  为什么ELISA实验会出现不显色的结果您知道吗？   现在做ELISA实验的人是有着很多的人，不过遇到的问题也是有很多，而新手出现的问题就多了。之前就有一个朋友问题，为什么做ELISA实验会不显色，是什么原因?那今天古朵生物小编就这个问题给大家分析一下，为什么ELISA实验会出现不显色的结果。   1.包被原：包括你的包被液有无问题，有没有配错。包被原一般加100微升，37度2小时;   2.封闭：封闭液用的是否适合?你说做了几次都没显色，空白孔也不显吗?如果空白也无颜 色，那封闭就没有问题。一般封闭是200微升每孔，也可以满孔封闭   3.一抗：检查你的一抗是否失效。是否是在37度反应   4.二抗：底物，底物缓冲液……这些都要好好检查!   5.洗涤：用PBST洗涤，包被和封闭时洗板3次;一抗二抗洗涤5次，每次间隔3分钟。手工和机器洗涤没什么不同，就是省力一些。洗5次不会有负影响，在一抗和二抗洗涤过程中，恰恰需要多洗几次，这样有助于减少非特异性吸附。   上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  如何减少ELISA试剂盒实验中背景因素的影响?    ELISA试剂盒 实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。在实验结束时，我们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景，下面是古朵生物技术小编的建议。   洗涤很重要   洗涤步骤看似很无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。   封闭关键   封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不充分，那么您可以尝试使用高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。zui常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同，是*的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过，它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。   抗体浓度须优化   我们通常会follow师兄师姐留下来的操作步骤，但是如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体的量。记住，非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。   检测试剂要适量   另一点也很显而易见：切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。   如果您的ELISA不幸地遇到了高背景，那么也无需太担心，依次查看ELISA系统中的组分，并排除可能存在的问题。悉心优化，相信很快就会有漂亮的结果。    ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  常见ELISA试剂盒试验技能要点？   1.准备好所有试验额定所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等;   2. 依据检测标本数量确认所需试剂的量;   3. 按阐明书将所用试剂平衡至室温，制造所需试剂;   4. 标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备，尽量分装做备份。短期内无法试验者，留意低温保存。   试验中为了确认信号和背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预试验中进行彼此相抗的滴 定。同时，应包括在适当范围内的规范品的系列稀释。按试剂阐明书惯例供给的范围进行操作。   规范品的制造：对于每种细胞因子应仔细阅读阐明书，留意每批的细节。在运用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可 能多地回收其间的细胞因子。依据每批阐明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。   为了优化灵敏度，主张过夜孵育规范品和标本。若运用过氧化物酶作为显色体系，应禁止在洗液和稀释液中加叠氮 钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时，如血清，主张在标本稀释液中加不相干的Ig。   ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  在试验中ELISA试剂盒的条件挑选   在 ELISA试剂盒 中，进行各项试验条件的挑选是很重要的，其间包括:   (1) 固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反响，调查其显色反响是否均一性，据此判明其吸附功能是否良好。   (2) 包被抗体(或抗原)的挑选：将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时刻及其蛋白量也有一定影响,一般多选用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，调查阳性标本的OD值。挑选OD值大而蛋白量较少的浓度。关于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。   (3) 酶符号抗体作业浓度的挑选：首先用直接ELISA试剂盒法进行初步效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体分别为不同的稀释度)在正式试验系统里地滴定其作业浓度。   (4) 酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应留意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是现在较为满意的供氢体。底物作用一段时刻后，应参加强酸或强碱以终止反响。通常底物作用时刻，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前参加。    ELISA试剂盒 上海古朵生物 科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  猪Elisa试剂盒的保存办法   1. 要留心避免呈现严峻溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有相似过氧化物的活性，因此，在以HRP为符号酶的ELISA试剂盒测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很简单在温育进程中吸附于固相，然后与后边参与的HRP底物反应显色。   2. 样本的搜集及血清别离中要留心尽量避免细菌污染，一则细菌的成长，其所分泌的一些酶或许会对抗原抗体等蛋白发作分化作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶自身会对用相应酶作符号的测定办法发作非特异性搅扰。   3. 血清标本如是以无菌操作别离，则可以在2～8℃下保存一周，ELISA试剂盒如为有菌操作，则主张冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。   4. 冰冻保存的血清标本须留心避免因停电等形成的重复冻融。猪ELISA试剂盒标本的重复冻融所发作的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发作损坏作用，然后引起假阴性效果。此外，冻融标本的混匀亦应留心，不要进行剧烈振荡，重复倒置混匀即可。   5. 标本在保存中如呈现细菌污染所形成的的混浊或絮状物时，应离心沉积后取上清检测。Elisa实验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验确诊办法。因为其试剂安稳、易保存，操作简洁，效果判断较客观等要素，已广泛应用在免疫学查验的各领域中。   大鼠ELISA试剂上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  科研实验血清的错误操作   现在做科研实验是很常见的事情，很多人都是通过实验得到自己想要的数据。而血清在实验中也是经常使用到的材料，动物血清来源广，也便宜，自然很受欢迎。不过人们在使用时血清的时候一定不要出错，不然轻则影响实验数据，重则毁掉实验。下面这些操作大家一定要注意：   1.解冻血清不随时摇晃均匀，使温度及成分均一。   2.在没有特别的要求下，还坚持要做热灭活。   3.直接由-20℃直接至37℃解冻，温度改变太大。   4.将血清置于37℃太久，血清变得浑浊，许多较不稳定的成份因此受到破坏。   注：在使用血清产品时，一定要从各个角度去考虑，不能大意。我公司技术专员建议您：血清应保存在-5℃至-20℃，若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。从冷冻箱中取出后，先置于2-8℃冰箱中使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。   试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  怎么防止血清中发作沉积?   在咱们科研小伙伴血清试验过程中，怎样防止血清中发作沉积也是一大问题!古朵生物特邀和您一起共享怎样防止血清中发作沉积。   血清，指血液凝固后，在血浆中除掉纤维蛋白分离出的淡黄色通明液体或指纤维蛋白已被除掉的血浆。其主要效果是供给根本营养物质、供给激素和各种生长因子、供给结合蛋白、供给促接触和扩展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培育中的细胞起到某些维护效果。   如何防止血清中发作沉积按如下操作可防止沉积的发作：   (1)冻结血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉积的发作。   (2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(当心勿形成气泡)，使温度与成分均一。   (3) 勿直接由-20℃直接至37℃冻结，因温度改变太大，简单形成蛋白质凝结而发作沉积。   (4) 勿将血清置于37℃太久，不然血清会变得浑浊，一起血清中许多较不稳定的成份也会因而受到破坏，从而影响血清的质量。   (5) 血清的热灭活十分简单形成沉积物的增多，若非必要，能够无须做此步骤。   (6) 若必须做 血清 的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，而且随时摇晃均匀。温度过高，时刻过久或摇晃不均匀，都会形成沉积物的增多。   血清上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

双抗体夹心法是检测抗原常用的方法 (1)将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。 (2)加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。 (3)加抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与抗体结合。彻底洗涤未结合的抗体。此时固相载体上带有的量与标本中受检抗原的量相关。 (4)加底物显色。固相上的化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。 ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  细胞培养过程中常见的问题说明   通过多次与客户的了解和反馈，的售后服务人员发现，客户在收到经过专业包装的细胞后，由于没有经过系统专业的检查和处理，就直接进行实验，以致于后期容易产生了一系列问题。鉴于客户对这一方面的知识有所欠缺薄弱，技术人员经过总结，对于在收到细胞怎样专业处理做了以下说明：   一、问：细胞收到之后怎么处理?   答：常温运输的细胞   首先观察包装是否完好，瓶口是否漏液，然后显微镜先拍摄4x 、10x、 40x不同倍数下的照片各两张。放入培养箱稳定两小时后开始换液，贴壁细胞把培养基全部吸去，加入6ml新的完全培养基，悬浮细胞离心后，用6ml完全培养基重悬细胞。注意细胞的培养环境。   低温运输的细胞，通常是用干冰寄送。   客户收到细胞后，观察干冰是否挥发，细胞是否溶解。没有问题可以直接放入液氮罐保存(长时间)，或者温冰箱(不超过一周)。   二、问：细胞冻存后，复苏效果不好?   答：目前还有很多人采取4°、﹣20°各半小时再转入-80°冰箱，这方法不好控制，有的细胞适合，有的细胞就达不到理想效果。现可采用程序降温盒来冻存，降温盒内添加的异丙醇可以达到每分钟降一度的要求，操作也简单。   冻存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干细胞可以添加马血清冻存，另外可以先将冻存液配置成80%血清+20%DMSO,重悬细胞时用血清重悬，避免直接用DMSO对细胞吹打造成损伤。   三、问：细胞有黑点怎么回事?   答：这种情况可能性就比较多了，首先判断黑点是在细胞表面，还是胞质内，还是在细胞外。细胞表面黑点增多可能是因为状态变差，可能是培养条件不适合导致，或者细胞活性降低。细胞质内黑点增多，先确认是否是多核细胞。细胞外有黑点，黑点游动则可能是细菌污染，不游动但随着培养时间增长黑点数量增多，应该检测是不是支原体污染，悬浮细胞多数有黑点，可能是碎片，可低速离心去除。腺癌多数是分泌因子，看着黑点增多。   四、培养基，血清怎么选?   答：好和细胞来源用的什么品牌使用相同的血清。基础培养基进口和国产差别不大。专业的细胞公司使用的血清都是经过了大量细胞培养验证的，不要轻易换，目前国内血清品牌较多，质量不齐。   上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  做ELISA实验需要注意哪些问题?   1、ELISA操作前准备工作    试剂盒 的选择ELISA操作前，应做好实验的设计、选择适合自己检测范围和灵敏度的试剂盒、提前订购和准备试剂及耗材、处理样本等准备工作。   样本处理在收集标本前需有一个完整的计划，需要清楚要检测的成分是否足够稳定。ELISA检测提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4°C备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请取材后，将标本及时分装后放在-20C或-80C条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。   2、ELISA标准品稀释   标准品严禁反复冻融。标准品的倍比稀释应事先做好准备，如离心管的准备和编号以及稀释液的准备;稀释时，应充分混匀;采用进口或者硅化的EP管，减少蛋白吸附。在实验孔内进行倍比稀释时，注意操作规范，枪头勿刮划预包被的孔底。   注意:@品牌试剂盒标准品是已倍比稀释好的，是即用型标准品。   3、ELISA操作中的洗涤   洗涤是ELISA实验中是多次数的操作，也是非常重要的步骤。不严格的洗涤容易出现洗不干净或交叉污染现象，实验重复效果差的现象。   不管用多道加样器、洗瓶、吸管，还是洗板机，严格按照说明书操作不要减少步骤洗涤的洗涤体积、洗涤时间和洗涤次数。注意标准化操作将减少实验误差和不同实验之间的误差。操作者常出现洗板不干净现象，请比照“手工洗板小贴士”操   a)洗液不要溢出孔外，以免污染相邻的孔，特别是每次洗板的前两遍，若高浓度的孔污染了低浓度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定会增高。   b)特别注意:设计实验的时候要考虑实验孔的位置保证甩掉洗液时，空白孔、低浓度孔或阴性对照组在上面或一侧或分开好。同时注意甩掉洗液的动作翻转(从正上方旋转120-150度)要迅速、干脆。甩板不要手腕左右摇摆、旋转来甩液体!甩出后以直线方式补2-3次甩出液体。   c)用干净的滤纸，不要用卫生纸，因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底，导致洗板不干净，结果偏高或偏低，重复孔的数值也会相差很大。   d)每次拍板不要重复在一个地方拍，特别是洗去酶的步骤;拍板不宜过轻，否则拍不干净，拍板很用力不会对蛋白有什么影响。但注意不要太重，以至把板条给拍断。每次洗板后轻叩几下，后一次一定要扣干净。   e)不能减少洗液体积、洗板时间和次数。洗板时间太短，洗板效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景干净。   以上文章摘自网络   本站所有转载文章系出于传递多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表我司立场。   ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  ELISA规范品溶解与稀释的正确过程：   1. 粉末规范品时间短离心，让因运送沾到管盖、管壁的规范品沉到管底。   2. 依据瓶标签参加必定体积的蒸馏水，加水后轻柔涡旋震动，室温静置溶解 10-30min，让粉末*溶解。   留意：加水后暂不必移液枪吹吸，防止蛋白未溶解，枪头带出部分蛋白，待*溶解后可吹吸或涡旋振动混匀。   3. 规范品梯度稀释:   (1)耗材预备：预备8个1.5Ml离心管，写上S1-S7、空白。   (2)规范品稀释液的挑选：   若血清、血浆、安排匀浆样本，用试剂盒中的规范品稀释液，梯度稀释规范品。   若细胞上清样本，主张用细胞培养基梯度稀释规范品。   (3)梯度稀释：依据说明书，每管参加等体积的规范品稀释液(培养基)。汲取同体积溶解好的规范品到S1管中，吹打10次混匀，涡旋5S。从S1管中汲取同体积溶液到 S2管，吹打10次混匀，涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。   (4)空白: 规范品稀释液(培养基)作为空白即零浓度。   留意：梯度稀释规范品时，涡旋震动混匀后可时间短离心，让到盖子、壁上的液体到管底，再开始稀释下个浓度。   规范品溶解、梯度稀释是ELISA试验要害点，按以上办法梯度稀释就可。   ELISA 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  如何作好软琼脂实验分析？   软琼脂(soft agar)实验一般用来检测细胞的集落形成能力。现在这种方法越来越多的用于分离癌细胞，也可以用来确认癌细胞是否具有癌化特性，为进一步做肿瘤小鼠移植模型奠定理论基础。该方法看似简单，但如果细节掌握不好，往往导致实验失败或数据缺乏说服力。如果你曾经在这个实验上栽了跟头，请不妨在如下几个方面进行尝试：   1.要确保在整个实验过程中所使用的琼脂处于*液体状态(>80℃)，尤其是在做基底时，如果琼脂凝固过快会导致基底不均一;   2. 做琼脂基底是应避免产生小气泡，一旦有小气泡产生，应该立即将气泡赶走;   3. 应使用2倍浓度的培养基，并加入20%FBS 和2%的P/S;   4. 在制备上层时，混合液体需要有顺序，一般为在同一个移液管中先吸取液态琼脂，再吸取同体积的2倍浓度的培养基，后在吸取2倍体积的细胞悬液，这样既可以保证琼脂不立即固化，又可以有效避免细胞因温度过高而烫死;   5. 因为该实验周期较长，为避免过度蒸发而导致琼脂裂解，需要保证小环境持久湿润，一般可在六孔板或培养皿下面垫上三到四层湿润的薄纸。   上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  小鼠ELISA试剂盒细胞因子实验条件   细胞因子小鼠ELISA试剂盒液体类标本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。   血清：室温血液自然凝结10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。   血浆：应根据标本的要求挑选EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。   尿液：用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实施。   小鼠ELISA试剂盒的试验条件如下：   1、固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。   2、包被抗体或抗原的挑选：将抗体或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。   3、 酶标记抗体作业浓度的挑选：首先用直接小鼠ELISA试剂盒法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法"，在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。   4、酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。   上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  链霉蛋白酶E的应用   链霉蛋白酶E来源于灰色链霉菌的一组蛋白酶(Protease from Streptomyces griseus),至少包含细胞外丝氨酸蛋白醇在内的三种蛋白酶活性。通常情况，丝氨酸蛋白酶具广谱的底物特异性，通过分子上一一个天冬氨酸，一个组氨酸，和一个丝氨酸组成的活性位点来调控。本酶选择性偏好水解谷氨酸或天冬氨酸羧基形成的肽键，常见的丝氨酸活性位点抑制剂可抑制其活性，如PMSF和DFP。链霉蛋白酶E(PronaseE)，还至少包含三种酪蛋白水解活性和一种氨基肽酶活性，这种酪蛋白水解酶分别命名为灰色链霉菌来源蛋白酶A(Streptomyces gniseus Protase A)，蛋白酶B(Streptomyces griseus Protease B)和胰酶(Sreptomyces griseus TIrypsin)。   链霉蛋白酶E   链霉蛋白酶E可用于蛋白的大量或者完全降解，还可用来研究蛋白酶抑制剂，以及热失活动力学。本制品常用于核酸分离步骤，在添加0.2%SDS和10 mM EDTA的体系内孵育0.5-3h即可达到目的。因其比已知的碱性蛋白酶在高pH环境下，甚至0.2N NaOH溶液中，活性强，因此非常适合不溶性蛋白的酶解实验，以及蛋白结构分析。另，还可与胶原酶和胰酶联合使用，以消化组织。也可作用纯化糖蛋白生产糖肽。   使用方法   [注意]:本品应用非常广泛，具体的使用方法和工作浓度请根据实验经验或参考文献来调整。   1.储存液制备:溶解于去离子水，配制成5-20mg ml的储存液，若用于DNA或RNA分离步骤，建议将溶液56°C加热处理15min,之后37°C孵育1h,此步骤能促使酶发生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后将储存液分成单次用量，-20°C冻存，通常情况1年稳定。   2.DNA分离:直接加入DNA制备体系(含有0.5-1%SDS以打破DNA-蛋白相互作用)，典型工作浓度范围250-500μg蛋白/ml,于37°C孵育1-4h。[注意:建议工作浓度范围在250-2000g/ml,依照具体情况而定]。   3.蛋白水解:溶解约0.2uM蛋白到0.2ml 50mM碳酸氢铵缓冲液，pH8.0(或磷酸盐缓冲液，pH7.0)，之后按照1%(w/w)加入Pronase E,于37°C孵育24h。根据情况，有可能需要添加4%(w/w)氨肽酶M，并于37°C再孵育18h。   链霉蛋白酶E上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...

  ELISA试剂盒检测处理步骤   1.试验真实值   从理论上说，样品中某一组分的含量必定有一个客观存在的真实数值，称之为“真实值”或“真值”。用“μ”表明。但实践上，关于客观存在的真值，人们不可能准确的知道，只能跟着测量技能的不断进步而逐渐靠近真值。实践工作中，往往用“标准值”代替“真值”。   2. 标准值   ELISA试剂盒选用多种牢靠的分析方法、由具有丰盛阅历的分析人员通过重复多次测定得出的效果平均值，是一个比较准确的效果.   实践工作中一般用标准值代替真值。例如原子量、物理化学常数：阿佛伽得罗常数为6.02×10 等。与我们试验相关的是将纯物质中元素的理论含量作为真实值。   3. 试验准确度   准确度是测定值与真实值靠近的程度。为了获得牢靠的效果，在实践工作中人们总是在相同条件下，多测定几回，然后求平均值，作为测定值。一般把这几回在相同条件下的测定叫平行测定。如果这几个数据彼此比较靠近，就说明分析的度高。   4. 度   ELISA试剂盒度是几回平行测定效果彼此靠近的程度。   上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒 ...