我最近在提土壤中微生物DNA用的是zhuo，1999，的冻融法，但是一直都提不出来。请问有谁可以指导一下吗。多谢啊。
这是试验方法。请大家指点指点啊，问题出在那了？
土壤样品预处理提取方法：参照文献的改进方法
A：称取土壤样品2g，置于50ml灭菌的离心管中。
B．加入6ml TENP buffer，300转摇床旋涡振荡10min。
C．12000 r/min离心5min，弃上清。
D．土壤颗粒沉淀中再加入6ml TENP buffer，按上述方法洗涤2次。
E．土壤颗粒沉淀中加入PBS buffer洗涤1次。
通过以上步骤土壤颗粒预处理过程完毕，接着进行土壤微生物DNA的提取。
F．土壤颗粒中加入13.5ml DNA extraction buffer，用旋涡器混匀。
G．将50ml离心管加入液氮冷冻，随后放入70℃水浴中融化，反复操作该步骤3次。
H．将土壤溶液中加入200ul蛋白酶K(20mg/m1)，置于37℃摇床中250转振荡1 h。
I．溶液中加入1.5 ml 10％SDS buffer，65℃水浴1h。水浴过程中每隔10min用手上下颠倒离心管1次。
J．将土壤溶液4℃，7000 r/min离心15min，收集上清。
K．将上清用氯仿和异戊醇(24：1)抽提2次。
L．水相中加入等体积的无水乙醇，常温放置，沉淀过夜。
M．12 000 r/min离心20 min弃上清，收集DNA沉淀。
N．用200u1 TE缓冲液溶解得到的溶液即所提取出来的土壤微生物总的DNA。
