贴壁培养的细胞提取蛋白可以消化下来后提取，也可以不消化直接提取，但是所用的裂解液的配方是不同的！我用的是后面的方法，结果挺好的。具体操作如下：首先记住一点：所有操作均在冰上进行！1）吸弃培养液， PBS洗3次；2） 加入cell lysis buffer，250ul/一小皿；3） 置摇床上要15min，注意此时是连着冰盒一起摇的，速度不要太大，以免将液体晃出；4）刮刀刮下细胞，移入EP管中；5）超声破碎，两到三次，每次2到3秒，注意将EP管置于装有冰快的小烧杯中；6）4度，12000rpm，15min ，离心；7）吸取上清至新的EP管中；8）测量蛋白浓度；9）-20度保存，所用的cell lysis buffer 的配方：Tris-cl pH 7.5 10mM （终浓度，下同），NaCl 150mM，SDS 0.1%，Triton-100 1.0%，A protein 10ng/ml，Leupeptin 2ng/ml，PmSF 1mM，我是把PmSF直接加到cell lysis buffer 里的，不是临用前加的，结果没有问题。
