可能原因 参考解决方案 样品中靶标物含量低或样品中无靶标物 设置阳性对照，重复实验 样品基质效应影响检测 重新稀释样品后复测 标曲选择不合适 更换拟合方式，选最合适的拟合方式 样本含量低于灵敏度 浓缩样本或更换灵敏度更高的试剂盒 ...

可能原因 参考解决方案 检测抗体、酶、或显色剂漏加 检查试验操作流程，重复试验 酶被叠氮钠污染 请使用重新配制的试剂 试剂添加顺序有误 检查复核试验添加顺序、流程，重复试验 波长不正确 核实检测波长 ...

可能原因 参考解决方案 试剂过期 检查试剂盒有效期，请勿用过期试剂 孵育时间过短 按说明书中规定的时间孵育 试剂污染 检查试剂是否污染，请勿用污染的试剂 酶标仪滤光片不匹配 检查酶标仪设置及滤光片是否匹配 试剂盒平衡不充分 确保试剂盒试验前平衡至室温 显色时间不够 增加底物显色时间 ...

可能原因 参考解决方案 洗板不充分 将洗涤液注入反应孔充分洗涤，彻底拍干孔中液体 酶结合物过量 检查酶稀释度，按说明书标识的稀释度稀释 底物污染 加底物前检查底物是否为透明无色，请勿用变蓝的底物，重新用新的底物试验 阴性对照孔被阳性对照污染 注意洗涤时不要把洗液溢出孔外，不使阴阳对照孔液体涟接一起 不同批次试剂混用 检查试剂批号，请勿用不同批次试剂 终止后太长时间读数 终止后应立即读数 ...

可能原因 参考解决方案 标准品稀释不当 确认是否正确稀释 标准品复溶不当 标准品复溶前短暂离心，确保是否完全溶解 标准品降解 确认保存方式及存放时间 曲线和标度不适合 尝试不同的拟合方式 边缘效应 试剂盒提前恢复室温，保证所有试剂温度一致 移液出错 使用校准好的移液器和正确的移液方法 标准品有污染 小心操作，避免污染 错误的孵育时间或温度 按照说明书的流程中操作 ...

可能原因 参考解决方案 孔中有气泡 加样小心，避免读数前产生气泡 孔板洗涤不均 / 不彻底 确保每次洗涤达到要求，按建议洗涤 试剂混合不充分 确保试剂已充分混合 加样量不一样 使用校准好的移液器确保每孔加样量一致 边缘效应 试剂盒提前恢复室温，保证所有试剂温度一致 样品制备 / 保存不一致 确保始终如一的样品，避免不同批次 / 保存条件造成的差异 ...

稀释后的生物素化抗体和酶结合物建议在当天用完，放置时间太长可能会影响其活性。可根据自己实验所需用量进行配制，不建议过量配制。 ...

样品反复冻融对蛋白影响非常大，能导致蛋白降解，非常不建议反复冻融样品。一般蛋白含量丰富的样本例如血清 / 血浆反复冻融 1-2 次，对于检测结果影响不是非常大，但是其他类型的样本，例如细胞上清液、肺泡灌洗液，反复冻融会使蛋白降解严重，对检测结果影响非常大。 ...

样本收集后 24 之内进行检测，放在 4 度冰箱即可。如果样本收集后不能立即检测，需将样本置于低温冰箱中，样本 3 个月内检测可于 -20 度保存，若存放时间更久，需要用 -80 度冰箱保存。 ...

试剂盒保存温度是 4 度，说明书中只有标准品标注的保存温度是 -20 度，由于标准品是冻干的重组蛋白， -20 度保存会延长重组蛋白的保存期限。试剂盒的有效期是 6 个月，冻干的重组蛋白能够在 4 度保存 6 个月，但是如果有条件或者想更长时间保存，还是建议能够将标准品 -20 度保存。 ...

ELISA 试剂盒对于温度的要求比较严格，温度是 ELISA 结合反应的重要影响因素，这样做主要是为了使试剂温度一致，在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。 ...

剂盒中提供的包被板已经包被过检测抗体，可以直接使用。进行 ELISA 实验时仅限使用本试剂盒中的组分，不能使用别的板条进行实验。 96 孔酶标板是可拆的，每条 8 孔。可以根据自己的实验取出部分板条使用，剩余的酶标板放回含有干燥剂的铝箔袋中， 4 度保存，不会影响酶标板性能。若拆封的酶标板没有正确储存，导致板子受潮，可能会影响检测结果。用过的板条不可重复使用。 ...

ELISA 试剂盒严格区分种属，一般不推荐跨种属检测，不同种属的同一个指标同源性相差可能会很大，抗体的特异性要求比较高，不同种属样本与抗体结合能力会有很大差别。 ...

ELISA 数据处理中所谓的“标准曲线”其实称为拟合曲线比较合适。标准曲线的拟合方式有多种，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于 ELISA 及其它生物学反应中的曲线拟合，但都只适用于曲线的一部分，有的适用于前半段，有的适用于后半段，有的适用于中间一段，而四参数 Logistic 曲线拟合则对曲线的全部都有较好的适用性。目前国际上最流行的免疫检测拟合方式是“四参数 Logistic 拟合 " ，用这种拟合方式往往能够比较精确的反映浓度和吸光度的曲线关系，从而进一步比较正确地获得样品中待测物质的浓度值。 建议用专门的软件进行数据处理，这样可以快速、准确地计算出结果。 ...

CV 值是统计学中的一个概念，中文是变异系数，可以认为变异系数和极差、标准差和 方差 一样，都是反映数据离散程度的绝对值。 CV 值越小，说明数据的波动程度越小。在描述板内、板间实验结果是否一致时常用到 CV 值，其越小，说明批内及批间差越小，试剂盒质量越好。 ...

ELISA 实验终止后形成的是黄色物质，该物质需要在 450nm 处测定其吸光度， 630nm 的吸光度只是检测板子本身的吸光度，与酶标板的材质有关，测 OD630 可以消除各个板孔不干净等非特异性因素引起的误差。如果所使用的酶标仪不可以检测 OD630 也没有关系，只读取 OD450 的结果也可以。 数据处理时所用的矫正值，是把所有孔的 OD 值减去标准曲线 0 浓度孔的 OD 值，进一步计算结果。 ...

竞争 ELISA ： 特点： 包被抗体，标记抗原，样本中的抗原与酶标抗原竞争与固体抗体结合，标本中抗原量含量越多，结合在固相上的酶标抗原越少，最后的显色也越浅。 缺点 ：整体的敏感性和专一性都较差。 用途： 小分子抗原或者半抗原的定量检测，当抗原材料中干扰物质不易去除或不易得到足够的纯化抗原时，多用于此方法检测；一般小分子激素及药物常用此法测定。 双抗夹心 ELISA ： 特点： 使用两个特异性单抗或者 1 个特异性单抗和 1 个特异性多抗，固相载体包被抗体，酶标记特异性抗体作为检测抗体。 优点： 使用两个特异性抗体检测，特异性好。 缺点： 成本高。 用途： 用于抗原的定量检测。 间接 ELISA ： 特点： 固相载体包被抗原，酶标记二抗，主要用于测抗体。 优点 ：使用酶标二抗增加了灵敏度，灵活度大，成本低。 缺点： 交叉反应几率升高。 用途： 通过检测血清中的抗体来检测病毒，如第 1 ， 2 代艾滋病诊断试剂。最常用于免疫动物血清中抗体含量的测定。 ...

抗坏血酸具有很强的还原性，非常不稳定。在光照的情况下很容易变质而生成脱氢抗坏血酸并进一步生成草酸而失去生理活性。所以要用棕色瓶子避光保存。 ...

一般试剂为粉剂的，可能更多的考虑到配成溶液后的稳定性差，如NADH，或者和其他试剂溶解在一起会在不同的温度下有其他的化学反应如氯化锰。 -20℃保存的粉剂建议溶解后分装保存，避免反复冻融。 ...

绿色荧光核酸染料特别适合于大片段 DNA 的检测 ( 大于 1kb 的片段 , 检测灵敏度与 EB 相当 ); 当 DNA 片段小于 1kb 时 , 检测灵敏度低于 EB, 特别是低于 500bp 的片段 , 绿色荧光核酸染料可能亮度很弱或检测不到 . 如果检测小片段的 DNA, 请选用 G8142, 该染色剂适合于检测所有片段大小的 DNA 片段。 一般的， 100mL 胶加 10 微升染料，如果觉得荧光较弱，可适当增加染料用量。 ...