果胶酶活性的检测[目的]本检测方法是用来果胶酶的催化活性。本方法适用于各种固体和液体果胶酶制剂。[说明]本方法适合于果胶酶的质量分析和质量控制领域。但不是本公司产品及其它公司产品的绝对活力的预测，而各种酶制剂的最终的酶活力在良好的实验操作下仍可发挥出更好的催化活力。[原理]果胶物质主要存在于植物初生壁和细胞中间，果胶物质是细胞壁的基质多糖。果胶包括两种酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三种中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果胶酶本质上是聚半乳糖醛酸水解酶，果胶酶水解果胶主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸钠法进行半乳醛酸的定量,从而测定果胶酶活力。[果胶酶活力单位定义] 1g(或1ml液体酶)酶粉,于50.0℃、ph3.5条件下,每分钟催化果胶水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量为一个活力单位。1. 试剂和仪器*本标准所使用所有的试剂若无任何说明，均为分析纯1.1 醋酸1.2 碘1.3 碘花钾1.4 浓硫酸1.5 果胶（sigma公司）1.6 硫代硫酸钠1.7 碳酸钠1.8 可溶性淀粉1.9 水浴锅1.10 碘量瓶2. 试剂的制备2.1 ph3.5的酸水用醋酸将蒸馏水调至3.52.2 1%果胶溶液：准确称取分析纯果胶1g，用酸水溶解煮沸，冷却后过滤，定至100ml。2.2 0.1n碘液：准确称取碘化钾5g，用蒸馏水溶解后，加入2.54g碘，溶解后定容至100ml。2.3 0.025mol/l硫代硫酸钠：准确称取6.2g硫代硫酸钠，加蒸馏水后定容至1l2.4 0.5%可溶性淀粉指示剂：准确称取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。2.5 1m碳酸钠溶液：准确称取10.6g碳酸钠，定容于100ml的水中2.6 2n硫酸：吸10ml的浓硫酸倒入170ml的水中2.7 酶样的制备准确称取1.000g固体酶或移取1ml液体酶样，定容至100ml，于50℃水浴浸取1小时，过滤，滤液为供试酶液。则该酶已经稀释100倍。3. 程序3.1 取1%果胶酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸馏水（ph3.5），在50℃水浴中保温反应1小时。3.2 取出后加热煮沸2~3min，冷却后，补水至20ml。3.3 取5ml反应液于100ml碘量瓶中，加1m碳酸钠溶液1ml，0.1n碘液5ml，摇匀，具塞，于室温暗处下放置20min。3.4 取出后加2n硫酸2ml，立即用0.05n硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，继续滴定至蓝色消失为止。3.5 空白试验以煮沸失活的酶液或蒸馏水代替酶液进行滴定。3.6 每个酶样最少做两个平行样。4. 计算 4.1 将测得的各平行样求od值的均值。4.2 计算酶的活性单位依据以下公式酶的活力= [(b-a)*n*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*w*60 ] 单位： u/g(ml)式中： a：样品滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。b：空白滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。n：硫代硫酸钠摩尔浓度。0.5：1当量硫代硫酸钠相当于0.5当量半乳糖醛酸。20：反应液总体积51：酶液体积以1ml计52：吸取反应液n：稀释倍数 w：酶粉重量g或酶液体积ml
