为了建立一种人T淋巴瘤细胞系,研究人员首先将一名男性盆腔琳巴瘤患者腹水中的肿瘤细胞接种到裸小鼠的皮下。经过65天,观察到肿瘤的形成,直径达到1厘米。然后,研究人员取出移植瘤组织进行传代接种,目前已经传至23代,成瘤率达到100%。第8代移植瘤组织被转移到体外培养中,使用1640培养液和20%小牛血清,在CO2孵育箱中进行传代,目前已经传至130代。在裸小鼠的腹腔中,肿瘤细胞形成腹水瘤,在塑料瓶中呈半悬浮半贴壁生长。
裸小鼠皮下移植瘤呈弥漫浸润生长,间质很少。瘸细胞约为小淋巴细胞的2倍大小,胞浆少,核圆,无明显的曲折或裂沟,可见1~ 2个偏位的核仁。透射电镜观察发现细胞间无联接结构。根据细胞形态,该瘤符合1982年国际工作分类的非曲核型淋巴母细胞琳巴瘤。
使用流式细胞仪和CD系列单抗进行细胞表面抗原分析。结果显示,全T细胞标记CD3-,CD7+(阳性细胞占69%);T细胞亚型标记CD4-,CD8-;NK细胞标记CD16-;B细胞标记CD19-。该细胞系缺乏正常T淋巴细胞分化标记,但CD7呈阳性,符合文献中报道的80%人类淋巴母细胞性淋巴瘤来源于T细胞,并且几乎都具有CD7+表型。
在裸小鼠皮下移植10代后,肿瘤生长迅速,45天后肿瘤长径超过4.5厘米。人T淋巴瘤细胞在体外培养中每次传代保留原培养上清液的1/8~1/2则生长良好,群体倍增时间为22.5小时,分裂指数在第3天高达56‰,每4天传代1次。如果缺乏上清液,则细胞生长缓慢。此外,人T淋巴瘤细胞培养上清液对正常人外周血淋巴细胞在体外培养中也有促增殖作用。通过流式细胞仪和碘化丙啶荧光探针,对该细胞系的DNA含量和细胞周期进行分析,结果表明人T淋巴瘤细胞为DNA异倍体细胞,DNA指数为1.18。细胞增殖周期各时相细胞相对数分别为:G0/G1期26.3%,S期61.5%,G2+M期18.1%。
人T淋巴瘤细胞的染色体形态属于人类,染色体数范围为46-53,众数为47。核型分析显示存在许多异常染色体。
[1] 史历,王吾如; 人T淋巴瘤细胞系的建立和初步鉴定。《哈尔滨医科大学学报》。