鲁索利替尼磷酸盐的生物活性及实验方法？ ¹

鲁索利替尼磷酸盐是一种具有高度选择性和有效性的JAK1/2抑制剂，对JAK1/2的亲和力远高于JAK3。它的IC50值分别为3.3 nM和2.8 nM。

一、鲁索利替尼磷酸盐的生物活性详解：

1. 体外活性：

鲁索利替尼对JAK2V617F介导的信号传导和增殖具有有效且选择性的抑制作用。在HEL细胞中，鲁索利替尼的EC50为186 nM。此外，鲁索利替尼还能显著增加Ba/F3-EpoR-JAK2V617F细胞系的凋亡，并抑制原发性MPN患者样本中的造血祖细胞增殖。

2. 体内活性：

通过口服给予小鼠180 mg/kg的鲁索利替尼，可以降低携带JAK2V617F表达细胞的小鼠的肿瘤负荷，而不会引起贫血或淋巴细胞减少。

二、鲁索利替尼磷酸盐的生物活性实验方法：

1. 细胞实验：

将细胞以2000个/孔的密度接种在白底96孔板中，使用0.2%最终DMSO浓度的鲁索利替尼处理细胞，并在37℃、5%CO2下培养48小时。通过使用Cell-Titer Glo荧光素酶试剂或活细胞计数的细胞ATP测定来测量细胞活力。将测得的值转化为相对于载体对照的抑制百分比，并使用PRISM GraphPad进行非线性回归分析，拟合IC50曲线。

2. 动物实验：

将Ba/F3-JAK2V617F细胞（每只小鼠105只）静脉内接种到6至8周龄雌性BALB/c小鼠中。小鼠被喂食标准啮齿动物食物，并随意提供水。每天监测小鼠的生存情况，对于垂死的小鼠进行人道杀死并认定为死亡。在细胞接种后的24小时内开始，每天两次通过口服强饲法给予载体（5%二甲基乙酰胺，0.5%甲基纤维素）或鲁索利替尼（INCB018424）处理。使用Bayer Advia120分析血液学参数，并使用Dunnett测试确定统计学显著性。

参考文献：

1. Quintas-Cardama A, et al. Preclinical characterization of the selective JAK1/2 inhibitor INCB018424: therapeutic implications for the treatment of myeloproliferative neoplasms. Blood, 2010, 115(15), 3109-3117.
2. Fleischman AG, et al. The CSF3R T618I mutation causes a lethal neutrophilic neoplasia in mice that is responsive to therapeutic JAK inhibition. Blood. 2013 Nov 21;122(22):3628-31.
3. de Bock CE, et al. HOXA9 Cooperates with Activated JAK/STAT Signaling to Drive Leukemia Development. Cancer Discov. 2018 May;8(5):616-631.