在液相色谱(LSC)中,我们经常遇到多组分样品,其中同时包含有弱吸附物质和强吸附物质。然而,很难找到一个等强度的混合物能够在合理的时间内洗脱全部组分,并且保持良好的分辨率。这就是洗脱色谱的普遍问题(GEP)。
为了解决GEP,我们需要在色谱展开期间改变谱带的迁移速度。而程序变溶剂(梯度洗脱)是解决GEP最常用的技术。
程序变溶剂涉及到在色谱展开期间流动相强度的变化。通常是在分离过程中增加流动相强度。变化可以分阶或连续地进行。在HP-LC中不常采用阶式变化,因为变化太剧烈时可能发生溶质顶替作用。实际上,强得多的溶剂前沿经过柱子时把溶质"携带"在一起,它们流出时是未分开的或分辨很差的谱带。如果变化较小,则溶质顶替的可能性就减少。
为了包括更广泛的变化范围,我们可以调节一个或多个二元混合物的组成,而不是使用纯溶剂来产生变溶剂程序。大多数现代液相色谱仪都设计成便于使用两种溶剂梯度。根据实验结果,我们可以选择两种流动相强度各不相同的溶剂,并将其混合,以得到处于二者之间的任何流动相强度。
在程序变溶剂中使用二元溶剂混合物时,我们可以利用凹形梯度轮廓来实现流动相强度的线性变化。这种变化对于LSC是有利的,因为它可以得到单位时间内的最大分离度,近似于相等的谱带宽度,没有谱带分裂,以及计算已测量或估算了K'值的溶质的保留体积。
总之,程序变溶剂是解决多组分样品洗脱问题的常用技术,通过调节溶剂的组成和流动相强度,我们可以实现良好的分离效果。