活细胞核染色试剂盒的应用及操作步骤？ ¹

背景^[1-3]

活细胞核染色试剂盒是一种无放射性的比色检测试剂盒，用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目。CCK法在药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等方面应用广泛。

检测原理：

CCK法是一种经典的周期检测方法。通过CCK插入性核酸荧光染料，可以选择性地嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合。CCK染色后，通过流式细胞仪分析，可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，并计算出各个期的百分含量。

操作步骤

1. 在96孔板中配制100μl的细胞悬液。

2. 将培养板在37℃、5%CO2的条件下预培养24小时。

3. 向培养板加入不同浓度的待测物质。

4. 将培养板在培养箱内孵育一段适当的时间。

5. 向每孔加入CCK8溶液，并在培养箱内孵育1-4小时。

6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

7. 如果暂时不测定OD值，可以向每孔中加入0.1 M HCl溶液或者1%wSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。

应用^[4][5]

用于转核技术建立可增殖神经细胞系的实验研究

通过将胎鼠皮质神经元细胞核转入骨髓间充质干细胞胞质体中构建转核细胞，可以建立一种可增殖的神经细胞系，为脑移植的供体细胞来源提供新的途径。

具体方法包括骨髓间充质干细胞的培养、鉴定骨髓间充质干细胞表面标志物、制备骨髓间充质干细胞胞质体、分离培养胎鼠皮质神经元、制备神经元细胞核、通过PEG介导神经元细胞核与骨髓间充质干细胞胞质体融合构建转核细胞等步骤。

参考文献

[1] Spontaneous expression of neural phenotype and NGF, TrkA, TrkB genes in marrow stromal cells[J]. Na Li, Hui Yang, Lingling Lu, Chunli Duan, Chunli Zhao, Huanying Zhao. Biochemical and Biophysical Research Communications. 2007(3)

[2] Neural differentiation potential of peripheral blood- and bone-marrow-derived precursor cells[J]. Sangnyon Kim, Osamu Honmou, Kazunori Kato, Tadashi Nonaka, Kiyohiro Houkin, Hirufumi Hamada, Jeffery D. Kocsis. Brain Research. 2006(1)

[3] Undifferentiated mouse mesenchymal stem cells spontaneously express neural and stem cell markers Oct-4 and Rex-1[J]. Fmj Lamoury, J Croitoru-Lamoury, Bj Brew. Cytotherapy. 2006(3)

[4] Development of embryos reconstructed by interspecies nuclear transfer of adult fibroblasts between buffalo (Bubalus bubalis) and cattle (Bos indicus)[J]. Fenghua Lu, Deshun Shi, Jingwei Wei, Sufang Yang, Yingming Wei. Theriogenology. 2005(6)

[5] 周竹娟. 转核技术建立可增殖神经细胞系的实验研究[D]. 第三军医大学, 2007.