了解如何有效制备盐酸小檗碱脂质体，对于发挥盐酸小檗碱在癌症治疗上的效果，抑制其副作用有重要意义。
背景：盐酸小檗碱（BBR）为一种广谱抗菌药物，对多种革兰氏阳性、阴性菌以及真菌、霉菌、病毒、原虫、线虫均 具有抑制杀灭作用。现代研究发现，还具有降血糖、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等多方面的药理作用。然而，盐酸小檗碱在胃肠道吸收较差，生物利用度低，半衰期短，静脉注射会引起血管扩张、血压下降、抑制心脏等严重反应。
然而研究也发现盐酸小檗碱体内抑瘤作用没有体外明显，可能因其肠道吸收较差，在体内很难达到对肿瘤细胞直接作用的较高血药浓度。而且盐酸小檗碱静脉给药可能引起药疹、过敏反应、血红蛋白及血红细胞减少、药敏性休克等副作用，1982年以来我国已明令禁止使用盐酸小檗碱静脉给药。因此，如何发挥盐酸小檗碱在癌症治疗上的效果，抑制其副作用是我们面临的一大问题。
脂质体是一种新的给药系统，静脉注射脂质体后，脂质体很快被网状内皮系统(RES)摄取，增加药物局部浓度，提高药物疗效，降低或减少药物的不良反应。
盐酸小檗碱脂质体的制备：
1. 超临界CO2微乳法
采用Box Behnken响应面法优化超临界二氧化碳(CO2)微乳法制备盐酸小檗碱脂质体的工艺。具体步骤如下：
（1）磷酸盐缓冲液的配置
精密称取Na2HPO4·12H2O 0.37 g，NaH2PO4·2H2O 2.0 g，溶于适量蒸馏水中，定容至1000 mL，并用NaHCO3溶液调节 pH=7.0，得磷酸盐缓冲液(PBS)。
（2）超临界CO2微乳法制备盐酸小檗碱脂质体
用适量无水乙醇溶解一定配比(3∶1)的大豆磷脂 (SPC，磷脂浓度30 g·L－1)和胆固醇(Chol)，得溶液A，将盐酸小檗碱(药脂比1∶4)加至PBS中，进行充分搅拌得溶液B。将A，B混合液超声混匀得乳黄色悬浊液，将此悬浊液置于超临界设备中，在相应条件下进行制备，反应结束后，恒速泄压得澄清半透明黄色盐酸小檗碱脂质体。
2. 薄膜分散-pH梯度法
具体实验步骤为：称取处方量大豆卵磷脂120 mg、胆固醇 40 mg，溶于适量的无水乙醇中，于250 mL的茄形瓶中，在60℃水浴条件下减压蒸发除去有机溶剂，得到透明均匀薄膜，加入柠檬酸缓冲液(pH 4.0)水化，在60℃条件下以转速100 r·min－1 水化 60 min后，过0.45μm滤膜2次，探头超声 (200 W)5 min，得略带乳光的空白脂质体混悬液。
取盐酸小檗碱溶液(1 g·L－1 )1 mL于西林瓶中，空白脂质体2 mL滴加到西林瓶中混合均匀，用碳酸氢钠缓冲液调节外水相的pH至6.8，60℃水浴中孵育20 min，立即用冷水降温，停止载药，即得盐酸小檗碱脂质体。
3. 改良pH梯度法
（1）BBR溶液的配制
精密称取BBR原料药 15.0 mg，用蒸馏水溶解并稀释至5 mL，摇匀，配制成质量浓度为3 mg·mL－1 的BBR溶液。
（2）枸橼酸缓冲液的配制
精密称取一定量枸橼酸，加入适量蒸馏水搅拌至完全溶解，以5 mol· L－1 氢氧化钠溶液调节pH至4.0，以蒸馏水稀释至 25 mL，混匀，即得。
（3）磷酸盐缓冲液的配制
精密称取磷酸氢二钠0.358 1 g，加入适量蒸馏水搅拌至完全溶解，向其中滴加磷酸至pH 7～8。转移至10 mL量瓶内， 以蒸馏水稀释至刻度，混匀，即得。
（4）BBR脂质体的制备
将HSPC、CH、m PEG2000 CHEMS按质量比3∶1∶1混合，加入0.3 mL无水乙醇，于65℃水浴中搅拌溶解，注入预热至相同温度的枸橼酸缓冲液4 mL，65℃水浴搅拌20 min，得空白脂质体初品；将初品以超声波细胞粉碎机处理 (200 W×2 min、400 W×6 min)后，再依次通过 0.8、0.45μm微孔滤膜3次，即得空白脂质体。将 331型阴离子交换树脂按常规方法经酸碱处理后，用重蒸水洗至中性，取1.6 mL(湿体积)装于2.5 mL注射器中，2000 r·min－1 离心3 min脱水，得阴离子交换树脂干柱，备用。取空白脂质体0.4 mL，上样于331型阴离子交换树脂干柱顶端，停留4 min 后，以2000 r·min－1 离心4 min，混匀(样品回收率为90%)，以碱性物质调节pH至一定值，得梯度脂质体(具有跨膜pH梯度的空白脂质体);取一定量梯度脂质体，按一定药脂比加入BBR溶液，于一定温度下孵育一定时间，冰水浴终止载药，即得BBR 脂质体。
参考文献：
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