了解如何有效制备盐酸小檗碱脂质体,对于发挥盐酸小檗碱在癌症治疗上的效果,抑制其副作用有重要意义。
背景:盐酸小檗碱(BBR)为一种广谱抗菌药物,对多种革兰氏阳性、阴性菌以及真菌、霉菌、病毒、原虫、线虫均 具有抑制杀灭作用。现代研究发现,还具有降血糖、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等多方面的药理作用。然而,盐酸小檗碱在胃肠道吸收较差,生物利用度低,半衰期短,静脉注射会引起血管扩张、血压下降、抑制心脏等严重反应。
然而研究也发现盐酸小檗碱体内抑瘤作用没有体外明显,可能因其肠道吸收较差,在体内很难达到对肿瘤细胞直接作用的较高血药浓度。而且盐酸小檗碱静脉给药可能引起药疹、过敏反应、血红蛋白及血红细胞减少、药敏性休克等副作用,1982年以来我国已明令禁止使用盐酸小檗碱静脉给药。因此,如何发挥盐酸小檗碱在癌症治疗上的效果,抑制其副作用是我们面临的一大问题。
脂质体是一种新的给药系统,静脉注射脂质体后,脂质体很快被网状内皮系统(RES)摄取,增加药物局部浓度,提高药物疗效,降低或减少药物的不良反应。
盐酸小檗碱脂质体的制备:
1. 超临界CO2微乳法
采用Box Behnken响应面法优化超临界二氧化碳(CO2)微乳法制备盐酸小檗碱脂质体的工艺。具体步骤如下:
(1)磷酸盐缓冲液的配置
精密称取Na2HPO4·12H2O 0.37 g,NaH2PO4·2H2O 2.0 g,溶于适量蒸馏水中,定容至1000 mL,并用NaHCO3溶液调节 pH=7.0,得磷酸盐缓冲液(PBS)。
(2)超临界CO2微乳法制备盐酸小檗碱脂质体
用适量无水乙醇溶解一定配比(3∶1)的大豆磷脂 (SPC,磷脂浓度30 g·L-1)和胆固醇(Chol),得溶液A,将盐酸小檗碱(药脂比1∶4)加至PBS中,进行充分搅拌得溶液B。将A,B混合液超声混匀得乳黄色悬浊液,将此悬浊液置于超临界设备中,在相应条件下进行制备,反应结束后,恒速泄压得澄清半透明黄色盐酸小檗碱脂质体。
2. 薄膜分散-pH梯度法
具体实验步骤为:称取处方量大豆卵磷脂120 mg、胆固醇 40 mg,溶于适量的无水乙醇中,于250 mL的茄形瓶中,在60℃水浴条件下减压蒸发除去有机溶剂,得到透明均匀薄膜,加入柠檬酸缓冲液(pH 4.0)水化,在60℃条件下以转速100 r·min-1 水化 60 min后,过0.45μm滤膜2次,探头超声 (200 W)5 min,得略带乳光的空白脂质体混悬液。
取盐酸小檗碱溶液(1 g·L-1 )1 mL于西林瓶中,空白脂质体2 mL滴加到西林瓶中混合均匀,用碳酸氢钠缓冲液调节外水相的pH至6.8,60℃水浴中孵育20 min,立即用冷水降温,停止载药,即得盐酸小檗碱脂质体。
3. 改良pH梯度法
(1)BBR溶液的配制
精密称取BBR原料药 15.0 mg,用蒸馏水溶解并稀释至5 mL,摇匀,配制成质量浓度为3 mg·mL-1 的BBR溶液。
(2)枸橼酸缓冲液的配制
精密称取一定量枸橼酸,加入适量蒸馏水搅拌至完全溶解,以5 mol· L-1 氢氧化钠溶液调节pH至4.0,以蒸馏水稀释至 25 mL,混匀,即得。
(3)磷酸盐缓冲液的配制
精密称取磷酸氢二钠0.358 1 g,加入适量蒸馏水搅拌至完全溶解,向其中滴加磷酸至pH 7~8。转移至10 mL量瓶内, 以蒸馏水稀释至刻度,混匀,即得。
(4)BBR脂质体的制备
将HSPC、CH、m PEG2000 CHEMS按质量比3∶1∶1混合,加入0.3 mL无水乙醇,于65℃水浴中搅拌溶解,注入预热至相同温度的枸橼酸缓冲液4 mL,65℃水浴搅拌20 min,得空白脂质体初品;将初品以超声波细胞粉碎机处理 (200 W×2 min、400 W×6 min)后,再依次通过 0.8、0.45μm微孔滤膜3次,即得空白脂质体。将 331型阴离子交换树脂按常规方法经酸碱处理后,用重蒸水洗至中性,取1.6 mL(湿体积)装于2.5 mL注射器中,2000 r·min-1 离心3 min脱水,得阴离子交换树脂干柱,备用。取空白脂质体0.4 mL,上样于331型阴离子交换树脂干柱顶端,停留4 min 后,以2000 r·min-1 离心4 min,混匀(样品回收率为90%),以碱性物质调节pH至一定值,得梯度脂质体(具有跨膜pH梯度的空白脂质体);取一定量梯度脂质体,按一定药脂比加入BBR溶液,于一定温度下孵育一定时间,冰水浴终止载药,即得BBR 脂质体。
参考文献:
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