小鼠T淋巴瘤细胞是一种源自C57BL/6(H-2 b)小鼠的淋巴细胞系EL4,该细胞系于1988年建立。它是通过电转质粒pAc-neo-OVA转化的淋巴细胞。该细胞在RPMI 1640(w/o Hepes)培养基中添加10% FBS、0.05 mM 2-mercaptoethanol和0.4 mg/ml G418进行培养。
小鼠T淋巴瘤细胞是一种具有特殊形态特征的细胞。它的胞体直径约为12~15μm,呈圆形或类圆形。胞核呈椭圆形,常偏向一侧。核染色质紧密而均匀,无核仁。胞浆较多,呈透明的淡蓝色,常含有少量嗜天青颗粒。
T淋巴细胞是一类免疫活性细胞,起源于骨髓的多能干细胞。在人体胚胎期和初生期,一部分多能干细胞或前T细胞会迁移到胸腺内,在胸腺激素的诱导下分化成熟,成为具有免疫活性的T细胞。
成熟的T细胞会通过血流分布到外周免疫器官的胸腺依赖区,并通过淋巴管、外周血和组织液等进行再循环,发挥细胞免疫和免疫调节等功能。T细胞的再循环有助于与体内进入的抗原物质广泛接触,增强免疫应答,并长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志物,主要是表面抗原和表面受体,这些标志物都是巨蛋白分子。
T细胞淋巴瘤可分为不同的病理亚型,包括T细胞、NK细胞淋巴瘤/白血病。它们可以原发于淋巴结、结外组织或皮肤。与侵袭性B细胞淋巴瘤相比,成熟或外周T细胞淋巴瘤的预后较差。
本研究评价了Id-DC疫苗在B细胞淋巴瘤荷瘤小鼠中的主动免疫治疗作用。
方法:利用细胞融合技术制备并筛选获得分泌Id的阳性克隆;采用体内诱导腹水和体外无血清培养法制备Id;通过优球蛋白沉淀法结合凝胶Suphecray-200过滤纯化Id;利用mCD40L-CHO细胞、TNF-α、LPS或单纯培养基刺激小鼠骨髓前体细胞来源的DCs,制备四种Id-DC疫苗。
通过3H-TdR掺入试验和51Cr释放试验测定DCs体外刺激T细胞增殖和CTL细胞杀伤毒效应。
同时,本研究还开展了CD40配基化的肿瘤特异性树突状细胞的免疫治疗作用及其相关机制研究。使用四种Id-DC疫苗对SB4和SBS荷瘤小鼠进行主动免疫治疗,观察肿瘤生长情况和小鼠生存期,并检测血清中抗Id抗体的分泌情况。
结果:成功获得了两株稳定分泌Id的Baib/c小鼠B细胞淋巴瘤细胞SB4和SBS;四种成熟的Id-DC疫苗均能抑制肿瘤生长,延长生存期。总体上评价CD40配基化的Id-DC疫苗的疗效最佳(P<0.05),但未完全缓解(complete remission,CR)荷瘤小鼠的肿瘤。Id-DC联合Id-KLH治疗可以激发更强的体液免疫应答,但不同Id-DC疫苗组之间结果无显著性差异(P>0.05)。
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