真菌培养基的应用和优化研究？ ¹

背景

真菌是一种具真核的、产孢的、无叶绿体的真核生物，包括霉菌、酵母、蕈菌以及其他人类所熟知的菌菇类。真菌独立于动物、植物和其他真核生物，自成一界。真菌的细胞有含甲壳素，能通过无性繁殖和有性繁殖的方式产生孢子。

真菌常用培养基

1、液体沙氏培养基（liquid sabourand medium，SDB）货号：L8300主要成分：蛋白胨（10g/L），葡萄糖（40g/L）用途：用于真菌、酵母菌增菌（GB标准）。

2、沙氏琼脂培养基（sabourand’s agar medium，SDA），又称为沙堡弱培养基货号：S9710主要成分：蛋白胨（10g/L），葡萄糖（40g/L），琼脂（20g/L）。

3、改良马丁培养基（martin broth modified）货号：M8810成分：蛋白胨（5g/L），磷酸二氢钾（1g/L），硫酸镁（0.5g/L）。酵母浸出粉（2g/L），葡萄糖（20g/L）。用途：主要运用于血液、胸、腹水等标本中真菌生长的液体培养基，检测标本中是否有真菌存在，从而可以判断组织中是否被真菌感染。

4、马铃薯葡萄糖琼脂（potato dextrose agar，PDA）货号：P8930成分：马铃薯粉（6g/L），葡萄糖（20g/L），琼脂（20g/L）用途：此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一，鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。

应用

用于产乌头碱内生真菌的分离、鉴定及固体培养基的优化研究

以白喉乌头根部样品为植物材料，分离和鉴定产乌头碱的内生真菌，为开发乌头碱来源提供更多新的候选资源；为了适应工业化生产，对产乌头碱内生真菌进行固体优化培养，以提高乌头碱产量。

试验取得以下成果：1.通过薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）对新疆白喉乌头根部样品中分离出的22株内生真菌进行筛选，发现其中一株编号为XJ-AC03的内生真菌可以产生乌头碱，含量为236.4μg/g（乌头碱/菌丝干重）；并通过质谱（MS）、核磁共振（NMR）方法进一步检测，结果表明内生真菌XJ-AC03菌丝中的乌头碱与乌头碱标准品的化学结构相一致。

2. 根据菌落形态及显微形态的观察结果，将菌株XJ-AC03初步鉴定为枝孢菌Cladosporium cladosporioides。在此基础上，对其ITS片段进行扩增，得到长度为552bp的DNA片段，在NCBI数据库中进行ITS序列同源性比对，XJ-AC03的ITS序列和NCBI中收录的Cladosporium sp.LH-CAF5（HQ717404）ITS序列同源性为99%，结合形态学特征和分子生物学鉴定结果将菌株XJ-AC03鉴定为枝孢菌Cladosporium cladosporioides。

3.在单因素试验的基础上，采用Plackett-Burman试验设计法，对影响菌株XJ-AC03产乌头碱的查氏培养基中的6个培养基成分进行了筛选，确定影响该菌株产乌头碱的主要成分为蔗糖、硝酸钠和氯化钾。

参考文献

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[2]Optimization of cellulase-free xylanase production by alkalophilic Cellulosimicrobium sp.CKMX1 in solid-state fermentation of apple pomace using central composite design and response surface methodology[J].Abhishek Walia,Preeti Mehta,Anjali Chauhan,Chand Karan Shirkot.Annals of Microbiology.2013(1)

[3]Endophytes from an Australian native plant are a promising source of industrially useful enzymes[J].Bita Zaferanloo,Aditya Virkar,Peter J.Mahon,Enzo A.Palombo.World Journal of Microbiology and Biotechnology.2013(2)

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[5]杨凯.产乌头碱内生真菌的分离、鉴定及固体培养基的优化[D].西北农林科技大学,2013.