最近提了很多次贴壁细胞的蛋白，PBS洗后，吸净，25cm2的细胞加150~200μL,6孔板加100μL的碧云天RIPA(加入PMSF),冰上裂解30min,4度，13000转，离心20min,总是没有沉淀看到。还尝试过加了裂解液直接用刮刀迅速刮刀1.5ML离心管里继续冰上裂解30min，离心后，仍没有沉淀；或者胰酶消化下来，PBS洗涤后，加RIPA裂解，加RIPA之前还能看到离心后管底的细胞很多，加了RIPA吹打，冰上裂解后，离心还是没有任何沉淀。
测的浓度都很低，只有0.1，换了同学的裂解液还是这样。跟我一同提的同学沉淀就有很多，是不是因为我比他多裂解了15min的原因呢？他裂解了15Min，我裂解了30min.第一次提的时候加了RIPA400μL，只等了几分钟就刮下来去离心了，那一次是少量的沉淀，浓度测出来是5点几，莫非裂解时间长了？那没有沉淀核酸之类的杂质都去哪里了呢？
