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NF-kB p65活化后总蛋白增加么?为什么免疫组化看不到入核?

各位老师同学,真心请教一下——我的实验想观察缺血再灌注后NF-kB p65的活化。做了免疫组化和western blot。结果发现western blot可以看到胞浆和胞核蛋白均明显增加,这说明总的NF-kB p65增加了吗?我看丁香园中有的前辈说总蛋白是不变的。请问为什么western的结果是这样?还有缺血再灌注损伤后免疫组化结果是胞浆中的NF-kB明显增加但看不到NF-kB入核,不知道为什么看不到明显的入核改变。是取材时间的问题吗?多谢各位前辈多多指教! 

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共1个回答
p65总量不会变化,但如果活化应该是从包浆迁移入细胞核,也就是说包浆减少的同时包核含量增加,你的western结果两者都增加,考虑核浆蛋白分离出现交叉现象,免疫组化要观察入核情况必须使用triton-100打孔。 
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