最近在做硅胶柱分，遇到些麻烦。有一样品,预计有A B C D四成分。TLC条件 石油醚：乙酸乙酯 9：1。结果如下：成分A Rf 0.5，成分B Rf 0.4，成分C Rf 0.25，成分D Rf 0.2。想得A和B，样品拌了硅胶大概0.5g 上2cm的柱子，硅胶大概装了10cm洗脱剂按常规极性减半，18：1冲柱，50ml加一个梯度，大概25ml收一瓶，后来点板发现还是没有分开。想请教一下，TLC条件确定柱分洗脱剂的比例？柱体积的计算，是不是还要考虑硅胶的溶胀？一个极性梯度需要加多少洗脱剂？是不是一直要冲到TLC显示没有东西出来？
