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请教大家一个有关阻断信号通路的问题?

各位高人,我想用siRNA阻断我所培养细胞的wnt/β-catenin信号通路,有人能告诉我具体的步骤吗?
我看的文献说是将能阻断β-catenin的siRNA先与转染液一起孵育形成转染复合物,然后将转染复合物加入到培养基中(请问大家这里是不是要用特殊的培养基,还有要不要加血清?),再用这个培养基处理细胞数个小时。请问是这样处理就行了吗,中间会不会还有其他步骤?还有一个极其重要的问题:这些过程是如何做到无菌操作的?


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共1个回答
这是求步骤的吗? 看你写这个是用lipo2000脂质体做的瞬转吧?你买lipo2000的时候会送你操作步骤的,这个你放心好了,上面很具体还有就是培养基的问题 转染所用的培养基是无血清的培养基 跟你你养该株细胞的培养基一样的 不过是无血清的 但是 实际上只是混合液是无血清的 你的细胞还是预留一部分完全培液的一般的步骤是1 转染前换新培液2 lipo2000与无血清培液混合静置5min 同时质粒或者siRNA与无血清培液混合静置5min3 上述两种混合液一起混合 并静置20min4 转染细胞4-6h后换新培液注意:做好control 对照试验 培液要先预热 细胞不要长太满,切提前一天铺板
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