本文旨在探讨利用大孔吸附树脂对胡芦巴中的原薯蓣皂苷进行纯化的方法和效果。
简介：大孔吸附树脂是一种有机高聚物吸附剂, 具有选择性好、吸附容量大、解吸容易、再生简便等优点。基于大孔吸附树脂的特点, 选用大孔吸附树脂来分离纯化胡芦巴中原薯蓣皂苷。
实验方法：
1 葫芦巴粗提液的制备
实验中的胡芦巴取当年生原药材, 去杂、洗净、低温干燥至恒重, 取出置于干燥器内冷却, 用粉碎机粉碎, 过40目网筛, 分装备用 。
2. 葫芦巴中原薯蓣皂苷的含量测定
2.1 色谱条件
Lichrospher C18柱 (4.6mm×250mm, 5μm) ;流动相:乙腈-水 (8∶92) ;柱温:30℃;流速:0.5m L/min;检测波长:203nm。
2.2 校准曲线和线性范围考察
依次精密吸取标准品溶液1、2、4、6、10、12μL进样, 记录峰面积。
3. 大孔吸附树脂的筛选
通过比较10种大孔吸附树脂的静态吸附和解吸的性能筛选出适合于纯化原薯蓣皂甙的树脂。
4. 动态吸附条件的确定
收集不同因素下的各洗脱液, 通过测定洗脱液中原薯蓣皂苷的浓度, 计算出原薯蓣皂苷的吸附量, 以吸附率为指标确定最佳吸附条件。
5. 上柱吸附体积流量的确定
精密吸取10m L原薯蓣皂苷提取液分别以2、4、6、8、10BV/h的体积流量上柱吸附, 收集流出液, 静置1h。然后用3BV的水以8BV/h的流速进行清洗, 收集流出液。合并2次的流出液, 测定原薯蓣皂苷的质量浓度，算出吸附率。
6. 树脂药材质量比的确定
调整胡芦巴提取液的上柱量, 使干树脂药材质量比分别为1∶1, 2∶1, 4∶1, 8∶1和16∶1 (质量比的单位为g/g) , 以70%乙醇作为洗脱剂, 用3BV (树脂床体积数) 70%乙醇, 在10BV/h下进行解吸, 收集洗脱液, 测定洗脱液中原薯蓣皂苷的质量浓度,算出吸附率。
7. 动态解吸条件的确定
把通过静态与解吸实验筛选出的大孔树脂进行湿法装柱，分别考察不同洗脱剂、洗脱剂用量、不同体积分数的洗脱剂、洗脱剂体积流量等因素，计算出原薯蓣皂苷的解吸率，以吸附量为指标确定最佳解吸条件。
8. 洗脱剂体系的确定
最常用的洗脱剂是水、甲醇、乙醇、丙、醋酸乙醒以及它们的混合液等。
9. 洗脱剂用量的确定
精密吸取胡芦巴提取液上样，然后用70%乙醇,以10BV/h的速度洗脱。按树脂床体积1、2、3、4、5BV的70%乙醇洗脱剂分别收集洗脱液，测定洗脱液中原薯蓣皂苷的质量浓度，计算原薯蓣皂苷的解吸率。
10. 洗脱剂浓度的确定
精密吸取胡芦巴提取液上样、然后分别用15%、30%、50%、70%、90%乙醇溶液以10BV/h的流速进行解吸，收集洗脱液。测定原薯蓣皂苷的质量浓度，根据式(3) 计算原薯蓣皂苷的解吸率。
11. 洗脱剂体积流量的确定
精密吸取胡芦巴提取液上样，以3BV的70%乙醇溶液作为洗脱剂。分别以4、8、10、12、15BV的流速进行解吸,收集洗脱液、测定。计算原薯蓣皂苷的解吸率。
参考文献：
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