如何分离和培养小鼠背根神经元细胞? ¹

小鼠背根神经元细胞是一种高度分化细胞，无法增殖和传代，只能进行原代培养且存活时间较短。为了成功进行相关实验，建议尽快处理细胞，不建议传代。

小鼠背根神经元细胞是通过胶原酶胰酶联合消化法和神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。每瓶细胞总量约为5x 10⁵ells，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵丹和真菌等。

如何操作细胞？

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，放入37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。

2. 细胞消化：

1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3分钟；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4) 待细胞完全贴壁后，进行培养观察；之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

小鼠背根神经元细胞的应用

神经组织体外培养方法是当代神经科学研究中一项非常有价值的手段。背根神经节中的小鼠背根神经元细胞富含周围神经系统感觉神经元，已广泛应用于轴突的导向及再生、中枢及周围神经系统的髓鞘形成、神经营养因子作用及受体分布、神经细胞衰老机制、基因治疗、组织工程等神经科学研究领域。

主要参考文献

[1] 黄鹤飞；陈颖；蔡维艳；李玉洁；杨庆；李琦；隋峰；刘思思；朱晓新。芍药苷对大鼠背根神经元细胞内Ca²⁺的影响。《中国实验动物学报》