如何制备大肠杆菌感受态细胞? ¹

一种经济快速的方法是使用一步法感受态细菌制备试剂盒。该试剂盒简化了操作步骤，并提高了感受态细菌的转化效率。它已成功应用于多种大肠杆菌菌株，包括常用的克隆株和表达菌株。

该试剂盒提供了两种制备感受态细胞的方法：标准制备法和快速制备法。这两种方法比传统的制备方法更简单快捷，而且不需要特殊的处理条件。使用快速方法制备的感受态细胞转化效率大于1.0×105 cfu/μg，而使用标准方法的转化效率大于1.0×106 cfu/μg。

感受态细胞制备流程：

1. 在培养基中培养过夜的菌液。

2. 将过夜培养的菌液稀释后继续培养至细菌生长至早对数期。

3. 离心并收集细胞。

4. 将细胞悬浮于缓冲液中，然后冷藏或冻存备用。

如何应用感受态细胞？

研究铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的生物学特性和基因组改造技术准备

溶原性噬菌体通过改变宿主菌和自身的基因组构成来改变宿主菌的生物学性状。对噬菌体的研究对于了解噬菌体与宿主的相互作用和揭示生物的多样性具有重要意义。因此，研究噬菌体及其基因组功能成为微生物学研究的热点之一。

通过电转化宿主菌的方式改造噬菌体PaP3基因组。通过实验条件的摸索，确定了适用于电转化噬菌体PaP3基因组DNA的条件。在适宜的条件下，转化效率可达2.1×103pfu/μg DNA，为改造后噬菌体基因组的电转提供了基础。

参考文献

[1] Whole genome sequencing of a novel temperate bacteriophage of P. aeruginosa: evidence of tRNA gene mediating integration of the phage genome into the host bacterial chromosome. Yinling Tan, Kebin Zhang, Xiancai Rao, Xiaolin Jin, Jianjun Huang, Junmin Zhu, Zhijin Chen, Xiaomei Hu, Xiaodong Shen, Lin Wang, Fuquan Hu. Cellular Microbiology. 2006(2).

[2] Use of Bacteriophages in Combination with Competitive Exclusion to Reduce Salmonella from Infected Chickens. H. Toro, S. B. Price, S. McKee, F. J. Hoerr, J. Krehling, M. Perdue, L. Bauermeister. Avian Diseases. 2005(1).

[3] Bacterial viruses as human vaccines? Clark, March. Expert Review of Vaccines. 2004(4).

[4] Bacteriophage lambda is a highly stable DNA vaccine delivery vehicle. Catherine D. Jepson, John B. March. Vaccine. 2004(19).

[5] Zhou Yingbing. Research on the biological characteristics of Pseudomonas aeruginosa bacteriophage PaP3 and the technical preparation of bacteriophage genome modification. Third Military Medical University, 2006.