硫氧还蛋白 (thioredoxin,TRX)系统是一种调节细胞还原/氧化状态的巯基氧化还原酶系统。试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被硫氧化还原蛋白(Trx)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的硫氧化还原蛋白(Trx)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D值)，计算样品浓度。
1.加样：在酶标包被板上设空白孔和待测样品孔。将样品稀释液40μl加入待测样品孔，然后再加入待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样时要避免触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设10个标准品孔。在第一、第二孔中分别加入标准品100μl，然后在第一、第二孔中加入标准品稀释液50μl，混匀。然后从第一、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔中分别加入标准品稀释液50μl，混匀。依此类推，直到第九、第十孔。每个孔的样品加量为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L。
3.温育：将封板膜封好后，置于37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干。每个孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。
6.温育：操作同3。
7.洗涤：操作同5。
8.显色：每个孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
9.加酶：每个孔加入酶标试剂50μl，除了空白孔。
10.终止：每个孔加入终止液50μl，终止反应（此时蓝色立即转变为黄色）。
11.测定：以空白空调零，依序测量各孔的吸光度（OD值）在450nm波长下。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
[1] 韩燕，p38MAPK信号通路在高糖诱导小鼠系膜细胞TXNIP表达中的作用。《河北医科大学》。
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