什么是Anti-ACTA2 Rabbit Monoclonal Antibody? ¹

Anti-ACTA2 Rabbit Monoclonal Antibody是一种特异性结合Anti-ACTA2的单克隆抗体，可用于多种免疫学实验，如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。

检测原理：采用双抗体夹心法来测定样本中的Anti-ACTA2水平。首先，在微孔板上包被纯化的Anti-ACTA2抗体，形成固相抗体。然后，依次加入样本中的Anti-ACTA2和HRP标记的Anti-ACTA2抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的Anti-ACTA2浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中Anti-ACTA2的浓度。

ACTA2（actin alpha 2）是一种肌动蛋白，也被称为α-肌动蛋白、α-肌动蛋白-2、主动脉平滑肌或α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）。Actins是一类球状多功能蛋白质家族，可以形成微丝。ACTA2是其中的一种亚型，参与平滑肌的收缩。ACTA2在各种哺乳动物中都有发现，具有高度保守性。在人类中，ACTA2基因位于10q22-q24区域。该基因的突变与多种血管疾病有关，如胸主动脉疾病、冠状动脉疾病、中风、烟雾病和多系统平滑肌功能障碍综合征。ACTA2（α-SMA）目前被认为是肌成纤维细胞的标志。

Anti-ACTA2 Rabbit Monoclonal Antibody的应用

用于乳腺癌转移中MMP1通路轴的研究

该研究旨在寻找调控乳腺癌肺转移的基础和实验研究的靶点，重点研究调控MMP1分泌的相关分子和调控方式。

研究方法：

1. 使用免疫共沉淀技术，将人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和V2M4细胞总蛋白与MMP1特异性抗体共沉淀，寻找与MMP1直接作用的蛋白。通过质谱分析和Western Blot验证，发现其中有差异表达的蛋白（包括ACTA2）。
2. 使用实时定量PCR检测相关蛋白的mRNA水平变化。
3. 使用激光共聚焦显微镜证明细胞内MMP1与ACTA2蛋白的结合。
4. 通过蛋白表达和Pull down实验验证蛋白相互作用的直接性。
5. 构建ACTA2基因沉默质粒并稳定转染V2M4细胞，进一步检测MMP1的表达，并进行细胞侵袭实验、增殖实验和三维凝胶实验。
6. 在免疫缺陷鼠乳房中注射转染细胞，观察体内肿瘤的生长和肺转移情况。
7. 构建ACTA2病毒过表达载体，转染MDA-MB-435和MDA-MB-231细胞，筛选稳定转染细胞，并进行ACTA2基因沉默质粒构建和转染V2M4细胞，进一步检测MMP1的表达，并进行细胞侵袭实验、增殖实验和三维凝胶实验。
8. 利用含钙和无钙的DMEM培养基检测钙对MMP1分泌的影响。
9. 构建肌动蛋白特异性载体（pro-50），检测ACTA2聚合与解聚对MMP1分泌的影响。筛选钙特异性配体门控通道，获得TRPV6表达差异。
10. 构建TRPV6基因沉默载体并稳定转染Vb细胞，进行体内和体外实验证明钙通道对MMP1分泌的影响。进一步验证实验结果，使用TRPV6的兴奋剂和抑制剂。

参考文献

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