如何提取植物材料中的RNA? ¹

在提取植物材料中的RNA之前，首先需要加入试剂。具体操作是将48ml无水乙醇加入RNA wash buffer II中，每毫升RB buffer中加入20μL硫基乙醇。

试剂使用的顺序是RB—RWF wash Buffer –RNA wash Buffer II---DEPC/ddH2O2（在65℃预热）。同时，需要提前准备一个水浴锅，将其调至65℃。

以下是提取植物材料中RNA的步骤：

1、将100mg植物材料用液氮研磨，并加入到1.5ml离心管中。

2、迅速加入500μL RB buffer，并用旋涡震荡使其完全悬浮。

3、将液体过柱（gDNA蓝），在室温下离心14000r，5min，以去除gDNA。

4、加入0.5倍体积的无水乙醇（约250μL）于过柱液体中，并进行吸打混匀。

5、吸取700μL过柱（RNA橙色），在室温下离心12000r，1min。

6、弃掉滤液，将剩余液体加入吸附柱中，进行12000r离心1min。（可重复步骤5和6过柱一次，以吸附RNA）

7、加入400μL RWF，进行10000r离心1min。

8、弃掉废液，加入500μL wash buffer II，进行10000r离心30s。

9、再次弃掉废液，加入500μL wash buffer II，进行10000r离心30s。

10、将过滤柱转移到新的1.5ml离心管中，进行12000r空离2min，然后在室温下晾干（滤膜干了即可，不能过干，否则难以洗脱），最后去除乙醇。

11、向过滤柱中加入65℃预热的DEPC/ddH2O2水50-100ul（分2次加，每次25ul洗脱RNA），在室温下放置2min，然后进行10000r离心2min。

12、使用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量，并使用分光光度计检测其浓度和OD值。最后，将RNA储存在-80℃。