ANTI-CDC34的应用及其相互作用蛋白的研究？ ¹

ANTI-CDC34是一种免疫抗体，可以特异性结合CDC34，并用于多种免疫学实验，如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。

人类基因组编码了两个E1酶、至少38种E2酶和超过600种不同的E3酶。其中最大的E3酶家族是cullin-RING连接酶（CRLs），最初被发现为多亚基Skp1-Cdc53/Cullin-F盒蛋白（SCF）泛素连接酶。SCF复合物包含核心亚基Skp1、Cdc53/Cul1和Rbx1/Roc1/Hrt1，以及一组称为F box蛋白的衔接子亚基，它们可以募集特定底物至核心复合物。

除了SCF复合物外，还有其他基于类似衔接子-cullin-RING结构的SCF样复合物，如Cul2、Cul3、Cul4A、Cul5和Cul6等泛素连接酶。因此，CRL类具有靶向数百种甚至数千种蛋白质降解的能力。CDC34是编码蛋白质的基因之一。

CDC34与多个途径相关，包括TCR信号传导和CLEC7A（Dectin-1）信号传导。与CDC34相关的基因本体论（GO）注释包括连接酶活性和泛素连接酶结合。CDC34在控制细胞周期和DNA复制中起着重要作用。与不同的E3复合物（包括SCF）相关的Cdc34已被证明在细胞分裂、信号转导和发育过程中靶向许多不同的底物进行泛素化和降解。

已经确定的Cdc34底物包括IκB、B-Myb、Wee1、MyoD、ICERIIα、ATF5、p27Xic1和p27Kip1等。此外，由于SCF对蛋白水解的要求，Cdc34的推定底物还包括β-连环蛋白、p21Cip1、E2F、细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白D。Cdc34通过其C末端的结构域自缔合，并且在体内被磷酸化和泛素化。该蛋白质可用于体外泛素化反应。

如何调控CDC34活性及其相互作用蛋白的研究方法

为了探索CDC34活性位点的调控及其相互作用蛋白，研究人员对CDC34的活性位点进行了点突变，并研究了突变体对自身泛素化和稳定性的影响。同时，利用LC-MS/MS技术寻找CDC34相互作用蛋白，并对这些蛋白进行了验证和相互调控关系的研究。

研究方法包括构建带有Strep-FLAG标签的野生型CDC34和突变型CDC34 C93S质粒，在HEK293T细胞中表达野生型和突变型CDC34，并通过蛋白免疫印迹检测它们的表达情况。同时，利用免疫沉淀的方法纯化与CDC34相互作用的蛋白，并通过银染和LC/MS-MS分析酶解后的多肽来鉴定这些蛋白。最后，通过生物信息学分析这些蛋白的功能，并通过蛋白印迹验证它们与CDC34的相互作用及调控关系。

研究结果及意义

研究结果表明，CDC34C93S突变体显著抑制了自身的泛素化修饰，从而增加了其稳定性。此外，CDC34C93S突变体还能增加部分相互作用蛋白的稳定性。通过质谱分析鉴定到了与CDC34相互作用的蛋白质，如MCM7、PRKDC和GNL3，并发现CDC34能够上调MCM7的水平，下调GNL3的蛋白水平。

参考文献

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