加热至160°能产生氨的含氮化合物与草酸二甲酯（熔点54°；沸点163．3°）混和后，如加热至上述温度，将会产生草酰胺：
草酰胺在和硫代巴比土酸干热时，会有深紅色产物形成；通过这一反应，可对草酰胺作出几乎特效的检定。磺胺嘧啶会有干扰。如上反应式所列，草酰胺的形成与有色物质的产生，可在一次操作中完成，这样，就可允许对热解时能产生氨的化合物得出检定。
这一范疇的化合物包括着：（1）脂族伯和仲胺类，（2）氨基酸类，（3）有机酸的铵盐类，（4）脂族羧酸的酰胺类，（5）脲及其含自由NH2－基的衍生物，（6）胍及其含自由NH2－基的衍生物。
应注意到，揮发无机酸的铵盐，如和草酸二甲酯与硫代巴比土酸加热到160°，也会发生草酰胺反应。因此，脂族伯、仲胺类的盐酸盐及硝酸盐，也会给出正反应。
操作手续 这个試验在微量試管中进行。将少許固体或其溶液的蒸发残渣，用数厘克草酸二甲酯和硫代巴比土酸处理，并放在130～160°的甘油浴中加热。1～3分钟内如有红色产物形成，即示正反应。
根据这个试验的灵敏度所示，可以说下列氨－給予体（草酰胺的生成者）的数量，已可检出：
| 15微克 盐酸乙（撑）二胺 | 10微克 丙烯酰胺 | 17微克 不对称－二苯脲 |
| 5微克 α－丙氨酸 | 20微克 壬二酰二胺 | 25微克 苯替双胍 |
| 5微克 天冬酰胺 | 10微克 甲脲 | 25微克 对称－二苯胍 |
| 15微克 烟酰胺 |
这个操作手续，曾检出约0．5毫克的下列各物：苄胺、磷酸精脒、磷酸精胺、盐酸乙（撑）二胺、α－丙氨酸、l－天冬酰胺、l－组氨酸、丙烯酰胺、扁桃酰胺、烟酰胺、壬二酰二胺、脲、乙酰脲、甲脲、烯丙基脲、苯脲、不对称－二苯脲、缩二脲、胍、二苯胍、苯胍、对称－三苯胍①、1－苯胺基脲（170°）、盐酸氨基脲。
① 这个化合物按其对称的化学式，应无应应。必须假定它或许有下列的平衡：
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