小鼠内皮抑素(ES)ELISA KIT采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）来测定样品中内皮抑素(ES)的水平。该方法通过将内皮抑素(ES)单克隆抗体包被在酶标孔中，加入待测样品中的内皮抑素(ES)，进行温育。温育后，加入生物素标记的抗内皮抑素(ES)抗体，与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物。随后进行温育和洗涤，去除未结合的酶。最后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中内皮抑素(ES)的浓度呈正相关。
小鼠内皮抑素(ES)ELISA KIT是一种用于检测内皮抑素(ES)水平的试剂盒。
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加入不同浓度的标准品50μL。
3. 样本孔先加入待测样本10μL，再加入样本稀释液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
该研究旨在检测内皮抑素基因腺病毒载体表达系统（Ad-mES）的体外生物学活性以及其在小鼠黑色素瘤治疗中的效果，并初步探讨内皮抑素的抗肿瘤机理。
方法：在HEK293细胞中扩增腺病毒，使用50%组织培养感染剂量法测定其滴度；通过RT-PCR、Western Blot和ELISA法检测目的基因的表达；使用MTT法和流式细胞术检测靶细胞的体外生长情况。采用多因素多水平析因分析法设计测定体内转染率；观察各组小鼠肿瘤的生长、转移和生存率，并通过Western Blot、免疫组化和透射电镜等方法鉴定组织内目的基因的表达、血管生成和靶细胞的生长。
结果：腺病毒的滴度为1010pfu/ml，靶细胞明确表达内皮抑素基因，Ad-mES能够抑制内皮细胞的增殖；在治疗小鼠黑色素瘤时，取瘤内注射和间隔7天给药Ad的体内转染率最高（MOI=500时，转染率为37.33%）。治疗组小鼠的平均生存时间延长，肿瘤体积增长减慢，肿瘤新生血管生成减少。
结论：Ad-mES对小鼠黑色素瘤具有较好的治疗效果。
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