血涂片在临床操作中经常使用，但你是否遇到过以下情况呢？你是否注意到它们的染色差异？A图的细胞染色非常艳丽鲜红（缓冲液pH6.4），B图的细胞染色适中（缓冲液pH6.8），C图的细胞染色呈灰蓝色（缓冲液pH7.4）。
这种染色鲜艳程度的差异不仅出现在临床操作中，我们在查找不同的参考书和图谱时，细心留意也会发现这种差异。
答案就是我们使用的染色缓冲液！
瑞氏-姬姆萨染色法于1902年提出，但直到1920年Majunkin才提及缓冲液的使用。瑞氏姬姆萨复合染色使用的缓冲液是磷酸盐缓冲液。
缓冲液的两个指标会影响染色效果，一个是pH值，另一个是离子强度（摩尔浓度）。
细胞中的大部分蛋白质都是两性电解质，其带电荷会随环境的pH值改变而改变。对于某种蛋白质来说，如果缓冲液的pH<pI（蛋白质的等电点），蛋白质就会带正电荷，容易与酸性伊红结合，从而使细胞染成鲜红色。相反，如果缓冲液的pH>pI（蛋白质的等电点），蛋白质就会带负电荷，容易与美蓝天青颗粒结合，从而使细胞溶液染成灰蓝色。
为了适度染色，避免过度鲜红或灰蓝对判断的干扰，实验证明缓冲液的pH值应该在6.4~6.8之间。
离子强度（摩尔浓度）即稀释程度。1920年Majunkin提出使用缓冲液配合染色时，提出的浓度是0.057mol/L，但后来的研究发现，这种浓度的缓冲液染色时间长，容易产生染色沉渣，染色效果不理想，因此提出了低离子浓度方案（<0.033mol/L）。
高浓度的缓冲液会导致染色不良，主要是因为缓冲液中的离子与染料中的离子竞争性结合，使细胞着色变慢，需要延长染色时间。此外，这些结合后的离子更容易析出形成沉渣，影响染色效果。
背景中有大量沉渣颗粒。
解决方案是配制适当浓度的缓冲盐溶液，并使用盐酸调整缓冲液的pH值。
例如，我们使用的这种商品化缓冲盐，按照说明书推荐的蒸馏水量加倍稀释，使用pH试纸测试pH值，并使用盐酸进行调整。
1 梁维岗，李喜萍，樊菊娥. 血细胞姬姆萨瑞氏染色法中使用缓冲液的探讨,临床检验杂志，1996.14(6):318-319
2 Majunkin, F A. JAMA, 1920.74:17
1
