生物医学工程细胞及分子

基因的分段克隆问题？

将基因分成了上下两段进行克隆，分别用引物上段F-R1，下段F2-R。上下两段的R1和F2在重叠区内。现在也得到了上下段序列，测序也正确，但是怎么得到序列的全长啊？已经尝试用F，R做引物，用测序得到的上下段质粒作模板来扩增全长，但是扩出来的还是原来上下段序列大小的两条带，得不到全长。各位大神们，求帮忙啊

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共3个回答

玄策，守约，销售经理 2019-08-26回答

直接分段PCR，将产物做模板并利用上下游引物融合PCR即可，不用分别克隆到质粒上。另外，你的片段是故意分成两段的吗？还是为了克隆全长而分成两段？现在很多好的酶可以扩增2,300bp的片段都没有问题，如果太长了，融合PCR估计也很难解决。

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瞳孔深深.芦苇，设备工程师 2019-08-26回答

研一么，刚开始别着急，慢慢来

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故俗，化工研发 2019-08-26回答

研一么，刚开始别着急，慢慢来
急呀，有好的方法吗

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