如图,加上内参做了三个的蛋白,自上而下分别是120kDa、82kDa,内参Actin 42kDa。但是最上面那个120kDa的蛋白显影非常模糊。
浓缩胶5%,分离胶12%
电压是浓缩胶中80v 30分钟待跑到分离胶更改为120v 约1小时
120kDa蛋白抗体按照说明书1:1000稀释的,只是1%脱脂奶粉配成了2%的。这个120kDa跟其他的不同,其他两个蛋白是按照转膜后常温封闭2小时,一抗孵育过夜。这个120kDa的蛋白我跟其他的一起做了,但是说明书上写的推荐protocol是过夜封闭,一抗常温2小时,会不会是这个孵育的影响呢?