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伤不起的氨基柱啊?

参考USP34-NF检测某物质含量:用4.6mmX150mm,5um氨基柱,流速1.5ml/min,(20mM磷酸氢二钾+0.25%氨水+磷酸调节PH=7.5)-乙腈=30-70,进样量20uL,柱温40℃,检测波长195nm;样品浓度1mg/ml(用50%乙腈溶解)。买了菲罗门短柱一根,用了7天,主峰峰宽由0.15变为0.5,理论塔板数由3000下降为600.
每次用之前90%水-乙腈冲洗40min,换90%乙腈-水冲30min,换30%水-乙腈冲30min,再上流动相冲50min,开始进样品。用完以后90%水-乙腈冲洗1h,再90%乙腈-水冲洗40min,保存。
后来试过热电的250mm 氨基柱;用了大概一个月也出现了类似的问题,柱效下降,基线抖动非常厉害。
特来请教一下各位,有没有人做过,用什么柱子比较好?抑或问题可能出在哪里?该如何解决比较好妥当?
在此谢过各位!

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共7个回答
我做过一个氨基酸的项目 确实氨基柱的冲柱子的方法  你可以好好看下说明书
我们一个项目也要好多柱子 但后来摸索到一种氨基柱 很好用 你可试试
请问是哪种氨基柱呢?
关于氨基柱的保养:
像楼主这种情况,氨基柱作反相使用时,操作和维护和C18柱完全相同。CN柱用于反相条件时,CN键会水解,尤其是在pH1.5-7.0范围以外,在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快,如果在这个条件下使用,需要清洗一下,也需要用10倍柱体积溶液冲洗,如下:95%水/5%乙腈、THF四氢呋喃、95%乙腈/5%水并保持95%乙腈/5%水继续冲洗,以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。在pH1.5-7.0条件时,也比较伤柱子,使用完以后要注意冲洗,可以参照上述方法,时间不需要那么长,可适当减少。柱子使用一定时间后,柱效下降,老化,也可如正相时清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时用10倍柱体积的下列溶液冲洗: 95%水/5%乙腈、THF四氢呋喃、95%乙腈/5%水再走流动相即可。

氨基柱的再生:
方案1:依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子(各以0.5ml/min的流速,20倍柱体积),再换流动相。这些清洗方法,主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法,色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。
方案2:NH2柱用于反相条件时,NH2键会水解,尤其是在该柱子pH范围以外,在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快,如果在这个条件下使用需要清洗一下,需要用10倍柱体积溶液冲洗,如下:95%水/5%乙腈; THF四氢呋喃; 95%乙腈/5%水; 并保持95%乙腈/5%水继续冲洗,以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。
方案3:柱子使用一定时间后,柱效下降,老化,也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗:95%水/5%乙腈; THF四氢呋喃; 95%乙腈/5%水 再走流动相即可。

这些研究资料网上很多,搜一下多得是了。

试试waters的XBridge Amide柱
请问这款柱子有什么特点,使用时候有什么要注意的地方么?
试试waters的XBridge Amide柱
氨基柱本来就比较脆弱的,水相不能高,一般30%就算很高了。柱子用完了,过度之后,可以用异丙醇冲洗保存,下次使用时候还要注意过渡。 即使是这样,我之前一个项目也用了3-4根,虽然柱效下降没你的厉害,但是我的杂质分不开了,只好买新的。菲罗门的。
你冲柱的方法有问题,冲洗氨基柱流动相中有机相不能低于40%,氨基柱本来就是正相柱,水量高了容易坏
我做过一个氨基酸的项目 确实氨基柱的冲柱子的方法  你可以好好看下说明书
我们一个项目也要好多柱子 但后来摸索到一种氨基柱 很好用 你可试试
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