180KD的膜蛋白western转膜条件怎样?

一180KD的蛋白，之前转PVDF膜用的是100v两个半小时，预染marker转得很漂亮，内参也很不错，但是目标蛋白条带却没有，请教各位大侠，这是什么原因？还有诸位大蛋白转膜时候条件怎样？我用的是湿转，谢谢

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共5个回答

第一考虑表达量的情况。建议测量标本中的含量。第二考虑抗体的问题。

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可能是降解的或者杂质

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可以看看抗体的抗原表位是不是和你的目标蛋白一致，如果抗体特异性没有问题，也许是目标蛋白表达量比较低，可以试试加大上样量，做几个浓度梯度看看。

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我觉得100V2h肯定是足够了，没转上应该是你目的蛋白的问题，可能是蛋白表达量太少或者你提蛋白的时间有问题。

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一般我都是60v过夜湿转，同样180kd的EGFR结果很好，对于这种分子量较大的蛋白我都是过夜的，还有用百分之八或十的胶来跑电泳，如果还是不出结果就要考虑抗体了

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