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DTT还原抗体二硫键...
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DTT还原抗体二硫键的问题?
最近做实验,用DTT还原抗体,没有加其他的
变性剂
,比如SDS,
盐酸胍
,尿素等,那么问题来了,DTT首先
还原的
是抗体那个位置的二硫键啊,是铰链区的还是抗体重链和轻链之间的,相关资料上哪里查啊。
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共7个回答
井妹妹,化工研发
2019-01-19回答
针对IgG1抗体先铰链区再轻重链,其他类型的不清楚。但是这两种二硫键的反应都很迅速,没有明显差别。
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怯度,化工研发
2019-01-19回答
最敏感的是轻重链间的二硫键。你可以看到两重链一轻链叫HHL的抗体片段化在生产过程中,很容易形成。随后是铰链区的两对二硫键。不过在DTT条件下,这两种二硫键都会被完全打开的,很难做到只打开其中一种。而轻链内部 ...
你是质谱分析的啊,果然专业。我现在的试验是只用DTT,不用SDS或者尿素之类的把抗体给先打开,好像只用DTT的话包裹在抗体内部的二硫键不容易被打开,我不太清楚轻重链间的二硫键和铰链区域的二硫键那个是包裹在内部的或者那个更敏感,非常感谢你的专业回答
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夜店男神射全,化工主管
2019-01-19回答
最敏感的是轻重链间的二硫键。你可以看到两重链一轻链叫HHL的抗体片段化在生产过程中,很容易形成。随后是铰链区的两对二硫键。不过在DTT条件下,这两种二硫键都会被完全打开的,很难做到只打开其中一种。而轻链内部 ...
你是质谱分析的啊,果然专业。我现在的试验是只用DTT,不用SDS或者尿素之类的把抗体给先打开,好像只用DTT的话包裹在抗体内部的二硫键不容易被打开,我不太清楚轻重链间的二硫键和铰链区域的二硫键那个是包裹在内部的或者那个更敏感,非常感谢你的专业回答
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肆,设备工程师
2019-01-19回答
最敏感的是轻重链间的二硫键。你可以看到两重链一轻链叫HHL的抗体片段化在生产过程中,很容易形成。随后是铰链区的两对二硫键。不过在DTT条件下,这两种二硫键都会被完全打开的,很难做到只打开其中一种。而轻链内部和重链内部二硫键,一般可以做到不完全打开。这个你可以查阅分析化学杂志,有文章做过单抗二硫键的这个研究的。
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如初.,设备工程师
2019-01-19回答
针对IgG1抗体先铰链区再轻重链,其他类型的不清楚。但是这两种二硫键的反应都很迅速,没有明显差别。
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训乖,应届毕业生
2019-01-19回答
你是质谱分析的啊,果然专业。我现在的试验是只用DTT,不用SDS或者尿素之类的把抗体给先打开,好像只用DTT的话包裹在抗体内部的二硫键不容易被打开,我不太清楚轻重链间的二硫键和铰链区域的二硫键那个是包裹在内部 ...
你是要质谱分析,还是要干嘛呢?你用了SDS或者尿素,后面就不太好上质谱了。SDS和尿素是为了打开蛋白结构,使其变性,的确可以帮助DTT更有效的打开二硫键。只用DTT的话,抗体内部二硫键不容易完全打开。轻重链和铰链区都不算抗体内部二硫键,不变形也很容易打开的。
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Imissyou..,化工研发
2019-01-19回答
最敏感的是轻重链间的二硫键。你可以看到两重链一轻链叫HHL的抗体片段化在生产过程中,很容易形成。随后是铰链区的两对二硫键。不过在DTT条件下,这两种二硫键都会被完全打开的,很难做到只打开其中一种。而轻链内部和重链内部二硫键,一般可以做到不完全打开。这个你可以查阅分析化学杂志,有文章做过单抗二硫键的这个研究的。
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