基因定点突变技术的重要性及方法？ ¹

基因突变是一种随机且不定向的现象，其发生频率非常低。然而，通过定点突变技术，我们可以有针对性地对已知基因的特定碱基进行增删或转换，从而改变相应的氨基酸序列和蛋白质结构。因此，基因定点突变技术在蛋白质工程研究中扮演着重要的角色。

基因定点突变的方法

寡核苷酸介导的定点突变：首先，我们利用转基因技术将目标基因插入到M13噬菌体的正链DNA上，形成含有目标基因的单链DNA。然后，我们使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作为引物，启动单链DNA的复制过程。这段寡核苷酸引物将成为新合成的DNA子链的一部分。将其转入细胞后，经过不断复制，我们可以获得突变的DNA分子。

盒式定点突变：该方法利用一段人工合成的含有突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中相应的序列。

PCR介导的定点突变：利用PCR技术进行定点突变，不仅可以大量扩增突变体，还可以在所设计的引物的5'端加入合适的限制酶酶切位点，为PCR扩增产物的克隆提供方便。此外，基因编辑技术CRISPR/Cas9也可以用于构建基因定点突变的细胞株。

主要参考文献

1. 胡文斌. 基因定点突变技术简介. 生物学教学, 2013年, 第38卷, 第12期.

2. 谭开秀, 刘承杰. 2000. 基因体外定点突变技术的研究进展. 前卫医药杂志, 17(4): 256-257.

3. 胡美浩. 1993. 定点突变及非定点突变技术的新进展. 生物工程进展, 13(6): 1-4.