HYCLONE是一种细胞培养产品品牌,由美国GE公司生产。其胎牛血清(FBS)原料来自澳大利亚、美国、加拿大和南美洲的高质量血源。这些血清分别被称为HYCLONE胎牛血清南美、HYCLONE胎牛血清澳洲和HYCLONE胎牛血清北美。
在细胞培养过程中,通常会添加5%-20%的HYCLONE胎牛血清澳洲。最常用的浓度是10%。使用10%的HYCLONE澳洲胎牛血清培养293T细胞效果非常好。但是对于其他细胞,可能需要使用5%的HYCLONE FBS或者20%的HYCLONE胎牛血清。具体选择合适的胎牛血清浓度需要根据细胞类型来决定。
1、长期保存的血清应储存在-20℃至-70℃的低温冰箱中。在4℃冰箱中保存的时间不应超过1个月。同时,避免将血清放置在37℃下过久,否则血清会变浑浊,有效成分也会受到破坏,从而影响血清质量。如果一瓶血清无法一次使用完毕,可以将40~45ml分装到无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此在冻入低温冰箱之前,必须预留一定的空间,以防止污染或玻璃瓶破裂。
2、一般情况下,供应商提供的血清已经是无菌的,无需再进行过滤除菌。如果发现HYCLONE牛血清中有悬浮物,可以将其与培养液一起过滤,但不要直接过滤HYCLONE牛血清。
3、解冻瓶装HYCLONE胎牛血清时,应采用逐步解冻法。将-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天,然后移至室温,待全部溶解后再进行分装。一般来说,可以将血清分装到50ml无菌离心管中,每管分装40~45ml。在溶解过程中,需要规则地摇晃均匀(小心避免产生气泡),以使温度和成分均匀,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃放入37℃解冻,因为温度变化过大会导致蛋白质凝聚并产生沉淀。
4、热灭活是指将完全解冻的血清加热至56℃,持续30分钟。在加热过程中,需要规则地摇晃均匀。这种热处理的目的是灭活血清中的补体成分。除非必要,一般不建议进行热灭活处理,因为这会导致血清中的沉淀物显著增多,同时也会影响血清的质量。补体参与的反应包括细胞毒作用、平滑肌细胞收缩、肥大细胞和血小板释放组胺、增强吞噬作用、促进淋巴细胞和巨噬细胞的化学趋化和活化。
5、HYCLONE牛血清中的沉淀物和絮状物主要是由于脂蛋白变性和解冻后纤维蛋白在血清中的存在。这些絮状物不会影响血清本身的质量。可以通过离心3000rpm,5分钟的方式去除,也可以不进行处理。在显微镜下观察,有些沉淀物会呈现为“小黑点”,这是由于经过热处理后沉淀物的形成显著增多。一般情况下,这些小黑点不会影响细胞生长。但如果怀疑HYCLONE牛血清的质量,应立即停止使用,并更换另一批号的血清。
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