ACHN细胞是一种人肾细胞腺癌细胞,具有以下特点:
在处理ACHN细胞时需要注意以下事项:
1.收到细胞后,请检查培养瓶是否破损或漏液,培养液是否混浊,如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.使用75%酒精消毒瓶身后放入培养箱中静置4-6小时,然后在显微镜下确认细胞状态并拍摄100倍和200倍的照片。如果有贴壁细胞脱落,可以收集上清离心,将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要进行消化处理,如果细胞长满90%,可以选择传代处理。
ACHN细胞的传代方法如下:
1.细胞密度达到80-90%时即可传代。
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2分钟后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液以约1000RPM的速度离心4分钟,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2.细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间约1分钟,加入4-5ml培养基混匀。
②在约1000RPM的速度下离心4分钟,弃上清,加入1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3.细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种。
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)。
②1-2分钟后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化。
③将细胞悬液以约1000RPM的速度离心4分钟,弃上清,加入1ml冻存液重悬细胞。
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
[1] 杨林 吴小候 罗春丽 何云锋 张尧 陈雄 张龙 陈力学;肾癌ACHN细胞exosome对自身细胞增殖和凋亡的影响;《南方医科大学学报》2012年 第10期。