AGL1农杆菌感受态细胞的特点是什么? ¹

AGL1菌株是一种C58, RecA型背景的农杆菌，其核基因中含有筛选标签rif和carb，这使得该菌株对利福平和羧苄青霉素具有抗性。为了方便转化操作，AGL1菌株携带了无自身转运功能的琥珀碱型hi质粒phiBo542Dh-DNA。该质粒含有转入植物基因组所必需的vir基因，而phiBo542Dh-DNA质粒自身的转移功能已被破坏。此外，该质粒还含有链霉素抗性标签strep，使得AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。经过pCAMBIA2301质粒检测，AGL1菌株的转化效率可达到5X 103cfu/ug。

如何使用AGL1农杆菌感受态细胞？

1. 取出保存在-80℃的农杆菌感受态细胞，等待其部分融化，然后将其插入冰中。每100ul感受态细胞中加入1ug质粒DNA（体积不大于10ul），用手拨打管底混匀，然后依次在冰上静置5分钟、液氮中5分钟、37℃水浴中5分钟、冰浴中5分钟。

2. 加入700ul无抗生素的LB或YEB液体培养基，在28℃下振荡培养2~3小时。

3. 以6000rpm离心一分钟，收集菌体，留取约10ul上清液，轻轻吹打重悬菌块，然后涂布于含有相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放置于28℃培养箱中培养2-3天。

使用AGL1农杆菌感受态细胞需要注意什么？

1. 最好在冰上融化感受态细胞。

2. 在混入目的DNA时应轻柔操作。

3. 当平板中只含有50ug/ml kan时，28℃培养48小时即可；当平板中同时加入50ug/ml kan和20ug/ml rif时，需在28℃下培养60小时；如果使用的平板含有50ug/ml rif，则需要在28℃下培养82-90小时。

主要参考文献

[1] 杨佳，怡荣，张立全，牛一丁，王秀珍，哈斯阿古拉。月见草△6-脂肪酸脱氢酶基因转化油菜的研究。华北农学报。