本文介绍了一种适用于从粪便样本中提取总DNA的试剂盒。该试剂盒能够提取包括细胞、细菌、寄生虫和病毒DNA在内的总DNA,并且适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本。使用本试剂盒可以处理多达300 mg的粪便样本,并在一小时内获得高纯度的DNA。纯化过程中无需使用有毒溶剂,也无需乙醇沉淀。该试剂盒采用独特的缓冲系统,可以高效结合DNA到吸附柱上,并去除样本中的蛋白杂质和其他有机化合物。最后,使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于各种下游实验,如酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot和分子标记等。
1、样品应避免反复冻融,以防提取的DNA片段较小且提取量下降。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1和GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GL是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀,请将其于56℃水浴重新溶解。
4、如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer SL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml),本试剂盒并未提供RNase A。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤11;可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
6)基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响,可将DNA稀释2-10倍通常即可解决。
储存条件:室温(15~30℃)。
[1] 粪便基因组DNA提取试剂盒产品说明书