人胃癌细胞系MKN-45的特点是什么? ¹

人胃癌细胞系MKN-45是由S Akiyama建立的，源于一位35岁患有印戒细胞癌的女性的胃淋巴结。该细胞系引种自DSMZ ACC-409。

如何进行人胃癌细胞系MKN-45的传代？

1）当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，将培养液倒掉，用PBS清洗细胞一次。

2）向培养瓶中加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5min。

3）弃掉上清液，用1-2ml完全培养基重悬细胞，按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。

如何进行人胃癌细胞系MKN-45的冻存？

1）当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，将培养液倒掉，用PBS清洗细胞一次。

2）向培养瓶中加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5min。

3）将细胞重悬于适量的冻存液（FBS：DMSO=9：1）中，并放置于冻存管中。

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5小时，然后将其移入-80℃过夜，24小时后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

如何进行人胃癌细胞系MKN-45的复苏？

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。

2）将冻存管中的细胞移至含6ml完全培养基的15ml离心管中，以1000rpm离心5min。

3）弃掉上清液，用6ml完全培养基重悬细胞，接种于25cm²培养瓶中，在37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。

主要参考文献

[1]王彩莲 陈宝安 余卫平 高峰 宋萍；多西紫杉醇对人胃癌细胞株MKN-45的抑制及诱导凋亡作用的研究。《东南大学学报：医学版》2006年 第4期。