L-鼠李糖是一种常见的单糖,其检测方法具有重要意义。本文将介绍其检测方法,为准确快速地检测L-鼠李糖提供参考依据。
简述:L-鼠李糖,别名L-6-脱氧甘露糖(L-mamnose-6-deoxy-L-mannose),是一种甲基戊糖,属单糖类,为白色结品性粉末,有甜味,甜度约为0.3,能溶于水和甲醇,微溶于乙醇。在水或乙醇中结晶的L-鼠李糖通常含一个结晶水,为α型,熔点82~92℃,105℃(266Pa)下升华,α型有甜味,加热时失去结晶水而转化为β型,熔点122~126℃,β型为针状结晶,在气中吸湿后又转化为α型,可作为食用甜味剂,主要用于化学和生物化学研究。
检测:
1. 硝基水杨酸法(DNS法)
二硝基水杨酸法是一种检测方法,其原理是在碱性条件下,二硝基水杨酸与还原糖发生氧化还原反应生成棕红色产物,在煮沸条件下实现显色,然后通过比色法测定还原糖的含量。由于糖类释放的还原基团数量影响显色深浅,而且对还原糖种类没有选择性,因此DNS法被广泛应用于多糖水解后产生多种还原糖体系的检测中。
选取盾叶薯蓣为原料,刘树兴等研究了从皂苷酸解液中提取L-鼠李糖的工艺。在提取出L-鼠李糖后,采用DNS法进行L-鼠李糖含量的测定,并建立标准曲线,得出回归方程,利用得率公式:得率(%)=L-鼠李糖质量/盾叶薯蓣原料质量×100%进行含量计算。测定结果为,盾叶薯蓣总还原糖的得率为2.19%。L-鼠李糖得率为1.5%。
2. 高效液相色谱法
高效液相色谱法(HPLC)是色谱分析的一个重要分支,其特点是利用高压输液系统,将不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等作为流动相,通过色谱柱进行分离,各组分在柱内分离后进入检测器检测,从而实现对样品的分析。
杨俊等选取Waters高效糖分析柱,利用梯度洗脱分离,建立了同时测定烟草中水溶性糖的新方法一高效液相色谱一蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)。试验条件:流动相为乙腈一水,流速1.0 ml/min,柱温30℃,进样量为20μl;蒸发光散射检测器漂移管的温度为80℃,载气选择氮气,流速为2.00 L/min。称取0.45~0.30 mm粒径的烟草样品1.0g,准确至0.0001g,加入25 ml的超纯水,超声波辅助浸提40min,温度40℃,过滤后量取5 ml溶液,流速为1.0 ml/min通过已活化的反相C18固相萃取柱,将最初2 ml溶液弃去,收集后面3 ml溶液,再经0.45μm的水系滤膜过滤。经HPLC分析得出L-鼠李糖线性范围为0.5~30.0μg,烟草及其制品中包括低含量L-鼠李糖等糖类物质的分析与质量控制可用该法测定。
3. 薄层色谱法
薄层色谱法(TLC),又称薄层层析法,是一种重要的实验技术,用于快速分离和定性分析少量物质。该方法在玻璃板、塑料或铝基片上涂覆均匀的固定相,然后在点样后展开,通过比较比移值(Rf)与适当对照物的Rf值,进行药物鉴定、杂质检查或含量测定。
据报道,采用薄层层析法对黄姜中的L-鼠李糖进行提取并定性分析。刘叔兴等从皂苷酸解液中提取 L-鼠李糖时,也采用此法进行定性分析。薄层色谱条件为:展开剂为V(乙酸乙酯):V(甲醇):V(醋酸):V(水)=60:15:15:10;显色剂为10%硫酸乙醇溶液;Rf值为0.76,斑点为圆形且无拖尾;喷湿润后于100 ℃烘烤 10 min,得到L-鼠李糖斑点,与标准品斑点一致。
4. 其他检测方法
由于 L-鼠李糖属于单糖、水溶性还原糖,因此可参考其他类似糖类的检测方法。目前国内对食品中糖含量的检测多采用化学检测法、高效液相色谱-荧光检测法、离子色谱法、毛细管柱气相色谱法、流动注射分光度法等。
参考文献:
[1]高旭东,郝宝成,梁剑平等. L-鼠李糖的制备及检测方法研究进展 [J]. 安徽农业科学, 2014, 42 (18): 5966-5968. DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2014.18.029.
[2]李玉山,王经安. L-鼠李糖结晶母液的脱色工艺研究 [J]. 食品工业科技, 2009, (01): 241-243. DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2009.01.060.