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RM-1小鼠前列腺癌细胞的培养和传代方法? 1

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RM-1小鼠前列腺癌细胞是来源小鼠前列腺癌组织的上皮细胞样贴壁细胞,生长培养基RPMI-1640+10%FBS+1%P/S,培养条件:CO2:5%,37℃。

5-α-双氢睾酮可影响该细胞的生长和酸性磷酸酶的产生。该细胞不形成均一的单层而是成簇生长,所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞;该细胞贴壁不牢,达不到汇合状态,而且会使培养基迅速变酸;传代后48h内一定要保持培养瓶静止.如果此时挪动培养瓶,会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况,需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁,细胞贴壁后可更换培养基。

 

RM-1小鼠前列腺癌细胞

如何培养和传代RM-1小鼠前列腺癌细胞?

1. 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。

2. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。

3. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。

4. 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代;2~3天1次。

RM-1小鼠前列腺癌细胞的应用

雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌的作用及机制研究

通过体内、体外实验,探讨方中有效抗癌成分雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌细胞株RM-1和小鼠前列腺癌模型的增殖抑制作用及其可能机制,以期为临床提供安全有效的抗前列腺癌药物。

方法:体外实验采用小鼠前列腺癌RM-1传代细胞,用MTT实验检测雷公藤内酯醇对RM-1细胞的增殖抑制作用;用吖啶橙荧光染色检测雷公藤内酯醇对RM-1凋亡细胞形态学影响;用流式细胞术分析雷公藤内酯醇对RM-1细胞周期及凋亡峰的作用;用梯状电泳方法检测雷公藤内酯醇对RM-1细胞DNA的凋亡作用;用RT-PCR法检测雷公藤内酯醇对RM-1细胞caspase-3、bcl-2 mRNA表达水平的影响。

体内实验采用C57BL/6小鼠皮下注射RM-1细胞,建立前列腺癌动物模型,检测肿瘤体积和重量计算肿瘤生长抑制率;TUNEL技术检测前列腺癌组织中凋亡细胞;免疫组化检测方法观察雷公藤内酯醇对实验动物肿瘤组织caspase-3基因及其蛋白bcl-2表达水平的影响。

结果:雷公藤内酯醇处理后RM-1细胞生长抑制率呈剂量和时间依赖性。在10和20 ng/ml浓度下,雷公藤内酯醇处理RM-1细胞12、24、36、48小时后,细胞生长抑制率分别为25.1%、36.1%、42.4%、58.5%。

参考文献

[1]Analysis of circulating tumor cells derived from advanced gastric cancer[J].Kosei Toyoshima,Akira Hayashi,Masahide Kashiwagi,Naoko Hayashi,Masaaki Iwatsuki,Takatsugu Ishimoto,Yoshifumi Baba,Hideo Baba,Yoshikazu Ohta.Int.J.Cancer.2015(4)

[2]Detection of circulating tumor cells in prostate cancer based on carboxylated graphene oxide modified light addressable potentiometric sensor[J].Yajun Gu,Cheng Ju,Yanjun Li,Zhiqun Shang,Yudong Wu,Yunfang Jia,Yuanjie Niu.Biosensors and Bioelectronics.2015

[3]Circulating tumor cells before and during follow-up after breast cancersurgery[J].Guus van Dalum,Gert van der Stam,Arjan Tibbe,Bas Franken,Walter Mastboom,Ivan Vermes,Marco de Groot,Leon Terstappen.International Journal of Oncology.2015(1)

[4]Real-time quantitative RT-PCR detection of circulating tumor cells frombreast cancer patients[J].Maowen Guo,Xiaotian Li,Shaohua Zhang,Hua Song,Wenhui Zhang,Xueyi Shang,Yuling Zheng,Hua Jiang,Qingyu Lv,Yongqiang Jiang,Huaijie Hao.International Journal of Oncology.2015(1)

[5]张瑞.雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌作用及其机制的研究[D].黑龙江中医药大学,2007.

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