生物医学工程

关于荧光定量PCR扩增效率的问题？

我在做绝对定量时标曲的扩增效率一直不稳定，同一管分装的质粒，同一台仪器，同样的反应条件，不一天稀释的，扩增效率从90%以上变成了只有50%，总共要做好几种菌的质粒，现在都出现了这样的问题。目前考察了酶，仪器和引物浓度扩增效率都没有改善，低拷贝数的质粒甚至都扩不出来了了，不知道哪里出问题了，难道是我的质粒降解了吗？

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共2个回答

绿里尐女，储运巡检员 2020-12-10回答

稀释质粒的液体用TE溶液（降低质粒降解的速度），不要用DEPC水。
不要稀释的浓度太低了，一般选择Ct值在小于30范围内做标准曲线。
浓度太低了扩不出来很正常。一般稀释到平均CT在35，临床要求同一样品扩增阳性率在95%以上，稀释到平均Ct在37，同一样品扩增阳性率跌到50%左右。

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桃羡，工艺专业主任 2020-12-10回答

需要taqman探针可以找我～

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