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质粒大提加入异丙醇没有沉淀?

今天用QIAGEN 的MEGA 试剂盒做了大提,在洗脱液加入异丙醇后可以见到有玻璃状的东西漂浮,然后我在4度冰箱里放置了大概两个多小时后再12000rpm ,30min,4度 离心后管壁什么都没有,我把液体倒出来看也没看到有沉淀,之后用70%乙醇洗涤同样条件离心后发现也什么都没有,想请问问题到底出在哪里呢?查了资料也看到说是因为我的异丙醇和我的洗脱液没有混匀,但也不可能一点沉淀也没有吧,这个是否和离心管也有关?我用的高速离心用的圆底的厚壁离心管,加上异丙醇沉淀的质粒DNA 本身就是吸附不牢靠所以被倒出来了,不过我在我倒出来的液体里也真没看到任何沉淀物,或者是我洗脱的质粒DNA 量本来就不够?!这个试剂盒的过柱太麻烦了,做了一天没有东西希望大家提点意见!卑微.jpg

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共8个回答
要不你试试小提的试剂盒怎么样,有可能你的菌被污染了,带目的质粒的已经不是优势菌种了,或者忘加抗生素了?不确定的试剂还是别用了,做实验可不能图省钱啊,时间浪费不起
...
抗生素Amp 肯定是按照平常的1‰加了的,我觉得可能是我的培养锥形瓶体积太小了,导致菌缺氧都死了
你说得对,不能图省钱,实验时间浪费不起

你的菌没问题吧,用试剂盒一般都没什么问题啊,小提能提出来不,要不换个试剂盒试试?
菌我觉得有问题当时小摇后换大摇是500ml LB 加到500ml锥形瓶里,离心后菌液沉淀大概1.6g/L ,颜色也是灰棕色的那种,之前用这个菌中提产量还是可以的。
试剂盒……过期了的,不过我用P 1,P2,P3感觉是有用的,我怀疑是洗脱DNA 那里的buffer 有问题

史上最萌女汉子
大清早就灌水哇

菌我觉得有问题当时小摇后换大摇是500ml LB 加到500ml锥形瓶里,离心后菌液沉淀大概1.6g/L ,颜色也是灰棕色的那种,之前用这个菌中提产量还是可以的。
试剂盒……过期了的,不过我用P 1,P2,P3感觉是有用的,我怀 ...
要不你试试小提的试剂盒怎么样,有可能你的菌被污染了,带目的质粒的已经不是优势菌种了,或者忘加抗生素了?不确定的试剂还是别用了,做实验可不能图省钱啊,时间浪费不起

哈哈,说话都没有人信

史上最萌女汉子

过期的柱子效率低,正常柱子的1/10这样
你的菌没问题吧,用试剂盒一般都没什么问题啊,小提能提出来不,要不换个试剂盒试试?

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