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生物医学工程

PCR条件优化？

各位朋友，新设计了引物并合成了，相关信息如图片，但是昨天
以如下程序跑PCR:
                                                                  94 2m
                                                                  94 40s
                                                                  56 1m
                                                                  72 1m
                                                                  72 10m
30个循环，退火温度跑了56度和58度的，去跑胶，内参很亮，但是56度情况下有两条带，58度一条，都模糊，想请大神们指点一二，怎么优化这个条件效果会更好，谢谢啦。

IMG_20190622_103147.jpg

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共9个回答

想逃，机修 2019-08-25回答

你想要达到什么样的效果呢？

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老街后街，化学工艺工程师 2019-08-25回答

还有，内参很亮，56℃时有两条带，是内参有两条带还是目的基因有两条带呢？
目的基因两个条带

4 评论 0 举报

活着.，给排水工程师 2019-08-25回答

还有，内参很亮，56℃时有两条带，是内参有两条带还是目的基因有两条带呢？

8 评论 0 举报

清新少女贩卖，工艺专业主任 2019-08-25回答

TAKARA的？你可以看一下酶的说明书。...
恩诺，好的，

19 评论 0 举报

描眉，机修/电工 2019-08-25回答

我用的是E taq
...
TAKARA的？你可以看一下酶的说明书。

20 评论 0 举报

Imissyou..，化工研发 2019-08-25回答

你做个梯度试试看，55-65℃

13 评论 0 举报

卫笙，工艺专业主任 2019-08-25回答

你想要达到什么样的效果呢？
我想找出最合适的pcr条件，后面要构建表达载体

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眼泪的错觉，实验室主任 2019-08-25回答

你的退火时间和变性时间建议用一点，现在很多酶的说明书一般设为10到15s即可。延伸时间基本根据1kb/1min来设置。一般情况下，56 度或者58度，60 度都可以做的很好的。所以我觉得你应该优化你的时间，确定模板质量，酶用好的酶，其他条件没什么好优化的。

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清风微微起，工艺专业主任 2019-08-25回答

你的退火时间和变性时间建议用一点，现在很多酶的说明书一般设为10到15s即可。延伸时间基本根据1kb/1min来设置。一般情况下，56 度或者58度，60 度都可以做的很好的。所以我觉得你应该优化你的时间，确定模板质量， ...
我用的是E taq

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