基因进不了gateway入门载体，有什么有效的方法可将该基因连到表达载体上?

这基因对原核载体有毒性否？你连质粒都无法扩增出条带？是长出的菌落单斑抽提的质粒？每一步都有可能有问题，从酶切到连接到转化都有可能。我实验室以前一师姐大半年时间，那个菌株怎么都弄不好，所有条件都换了发现还是不行，后来发现因为她的基因对原核宿主有毒性所以。。。 多想想哪步可能出问题。经验告诉我，你越觉得理所当然不会出问题的越可能就是真正的原因。