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利用CRISPR/Cas9技术在基因编码区敲除,少量碱基插入或缺失会影响基因的表达量吗?

利用CRISPR/Cas9技术进行植物的基因敲除,敲除的位点在CDS(编码区),结果在靶点处引入了几个碱基的插入或缺失突变,现在的共识是这些少量碱基的插入或缺失(Indel)会导致移码突变,进而破坏掉相应蛋白功能,获得基因功能缺失的表型,也就是说CRISPR/Cas9行使作用是在蛋白水平了。

请问,CRISPR/Cas9引入的少量碱基的突变会影响基因的表达量吗(非可变剪切位点)?我个人觉得RNA水平上几个碱基的改变对基因的表达量影响不大。有人做过相关实验能够证明CRISPR/Cas9基因敲除只是移码突变而不影响基因的表达量吗?

若是CRISPR/Cas9的敲除既产生了移码突变又能够改变RNA水平基因的表达量,又怎样确定某个基因的功能到底是通过RNA还是蛋白行使功能呢?

希望大神能够不吝赐教,万分感谢。

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共3个回答
若有合适的剪切位点,不排除产生剪接体,但整体转录本的量可能部受影响
移码突变转录本应该没什么变化,主要还是要在蛋白水平验证
我做过qPCR实验,碱基缺失对RNA的水平影响不大,大概10%左右,主要是碱基缺失产生的移码突变,导致蛋白翻译的错配或者提前终止。
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