高效液相条件摸索？

首先搞清楚待测组分的物化性质(极性、溶解度、pH值、官能团分布），再选择合适的色谱柱和流动相在合适的检测波长（选择响应较高且吸收光谱曲线平缓区）下进行，先可以进行梯度洗脱找一个合适的配比。

你的HPLC有用loading column 和analytical column吗？一般的文献都不讨论loading column，只讨论analytical column的条件，峰没有了，可以检查一下你的switching time是否合适。梯度一般从低浓度的有机溶剂开始试，逐渐增加，尤其要注意柱子的平衡，一定耐心一点。Good luck！

首先搞清楚待测组分的物化性质(极性、溶解度、pH值、官能团分布），再选择合适的色谱柱和流动相在合适的检测波长（选择响应较高且吸收光谱曲线平缓区）下进行，先可以进行梯度洗脱找一个合适的配比。 看了一些文献，色谱柱、流动相、检测器也差不多确定了，只是梯度不会调整，就是自己在瞎捉摸，有的时候把时间增加反而没有峰了，

先看下分子结构 如果有羧基等极性基团的话 一般需要用缓冲盐 此外 如果用的是反相柱的话 两个峰分不开 在梯度中适当增加水相的比例 我是测植物油中的甘油三酯，成分比较复杂，流动相用的是乙腈和异丙醇，峰是分为几簇的，不知道怎么更好的把那几簇峰分开

先看下分子结构 如果有羧基等极性基团的话 一般需要用缓冲盐 此外 如果用的是反相柱的话 两个峰分不开 在梯度中适当增加水相的比例

先别着急进行实验，把待测物质的理化性质都弄清楚了，然后再选择合适的色谱柱和流动相，如果能再参考些文献就更好了，最后适当调整流动相比例，色谱柱类型，柱温等等。走梯度特别适合多种物质分离，二元不够可以三元，三元不够可以四元，梯度根据实际分离效果调整吧