SW1990人胰腺癌细胞的培养方法及应用研究？ ¹

背景^[1-3]

SW1990人胰腺癌细胞是从胰腺外分泌腺的胰腺腺癌II期患者的脾转移灶中建立的细胞株。

细胞培养步骤

培养基及培养冻存条件准备：

1）准备L15培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，100%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3）传代方法：

4）1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

5）2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6）3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

7）4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于蛋白酶激活受体2在人胰腺癌细胞SW1990增殖及侵袭转移过程中的作用研究

采用侵袭转移能力较强的人胰腺癌细胞株SW1990为靶细胞,初步探讨PAR-2促进胰腺癌侵袭和转移的可能的分子机制。

方法:RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测SW1990细胞中PAR-2 mRNA及蛋白的表达情况。绘制SW1990细胞生长曲线,MTT法检测胰蛋白酶和PAR-2激动肽SLIGKV作用前后SW1990细胞增殖情况,并确定合适的各药物浓度和作用时间。流式细胞术（FCM）检测各实验组细胞周期分布。Transwell小室法检测各组细胞侵袭和迁移能力。RT-PCR法检测胰药物作用前后MMP-2、MMP-9、VEGF-A、VEGF-C、IL-8 mRNA表达的变化。

明胶酶谱法检测胰蛋白酶和SLIGKV作用细胞前后MMP-2、MMP-9明胶酶活性的变化。ELISA法检测药物干预SW1990细胞8h、16h、24h、32h后分别收集各实验组细胞上清液,检测各组细胞相对应的各个时间段上清液中VEGF-A、VEGF-C及IL-8的蛋白含量变化。结果:PAR-2在胰腺癌细胞SW1990细胞中高表达。

参考文献

[1]The Akt expression correlates with the VEGF-A and-C expression as wellas the microvessel and lymphatic vessel density in breast cancer[J].Shinichi Tsutsui,Ayumi Matsuyama,Manabu Yamamoto,Hideya Takeuchi,Yumi Oshiro,Teruyoshi Ishida,Yoshihiko Maehara.Oncology Reports.2010(3)

[2]Dual effect of the novel peptide antagonist K‐14585 on proteinase‐activated receptor‐2‐mediated signalling[J].Fui GoonGoh,Pei YuenNg,MaryNilsson,ToruKanke,RobinPlevin.British Journal of Pharmacology.2009(7)

[3]Vascular Endothelial Growth Factors,Angiogenesis,and Survival in Human Ileal Enterochromaffin Cell Carcinoids[J].Besig,Sophie,Voland,Petra,Baur,Dorothee M,Perren,Aurel,Prinz,Christian.Neuroendocrinology.2009(4)

[4]Novel antagonists for proteinase‐activated receptor 2:inhibition of cellular and vascular responses in vitro and in vivo[J].TKanke,MKabeya,SKubo,SKondo,KYasuoka,JTagashira,HIshiwata,MSaka,TFuruyama,TNishiyama,TDoi,YHattori,AKawabata,MRCunningham,RPlevin.British Journal of Pharmacology.2009(1)

[5]段泽星.蛋白酶激活受体2在人胰腺癌细胞SW1990增殖及侵袭转移过程中的作用研究[D].河北医科大学,2011.