亲核素Β1抗体的检测原理及应用？ ¹

背景^[1-3]

亲核素Β1抗体是一种多克隆抗体，能够特异性结合亲核素Β1。它在多种免疫学实验中被广泛应用，包括Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。

检测原理：采用双抗体夹心法来测定样本中的亲核素Β1水平。首先，在微孔板上包被纯化的亲核素Β1抗体，形成固相抗体。然后，依次加入亲核素Β1和HRP标记的亲核素Β1抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的作用下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成黄色。样品中的亲核素Β1浓度与颜色的深浅呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中亲核素Β1的浓度。

亲和素是一种糖蛋白，可以从蛋清中提取。它的分子量为60kD，每个分子由4个亚基组成，可以与4个生物素分子结合。

通常使用的是从链霉菌中提取的链亲和素（streptavidin）。生物素（biotin）又称维生素H，分子量为244.31，存在于蛋黄中。通过化学方法制成的衍生物，如生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS），可以与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。

亲和素与生物素的结合非常稳定，虽然不属于免疫反应，但具有特异性和强大的亲和力。由于一个亲和素分子可以与4个生物素分子结合，因此可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。将亲和素和生物素与ELISA结合使用，可以大大提高ELISA的敏感度。

应用^[4][5]

亲核素Β1抗体在人类染色体13q32区域精神分裂症相关基因的遗传学研究中的应用

研究人员选择人类第13号染色体长臂三区二带（13q32）作为精神分裂症易感基因候选区域，利用家系连锁不平衡分析和群体case-control相关分析方法，在该染色体区域内筛选与精神分裂症相关联的基因位点。

研究对象为229个中国汉族精神分裂症患者及其健康父母双亲组成的核心家系。研究人员利用生物信息学工具和数据库，确定了13q32染色体区域内的48个已知基因，并浏览了每个基因上的SNPs。

在每个基因的DNA序列上，研究人员分析了含有限制性内切酶酶切位点且杂合度大于10%的SNPs。他们选定了3个候选基因和2个EST上的7个SNPs，包括结合糖基磷脂酰肌醇的硫酸乙酰肝素蛋白多糖6基因（GPC6）的rs2892679、丝氨酸/苏氨酸激酶24基因（STK24）的rs1886089和亲核素β3基因（KPNB3）的rs626716、rs624066和rs2761072，以及LOC160889（EST位点）的rs2282135和LOC122330（EST位点）的rs942358。

这些SNPs的长度横跨13139.81kb，在GPC6和LOC122330两个基因之间构建了SNPs连锁不平衡图。研究人员使用PCR-RFLP方法检测了SNPs的基因型，并使用SPSS统计学软件对基因分型数据进行管理和分析。他们还使用拟合优度卡方检验验证了每个SNP基因型在抽样群体中的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。

研究人员使用EH plus和UNPHASED软件分析了两个SNPs之间的连锁不平衡程度。除了进行单倍型相对风险（HRR）和传递不平衡（TDT）方法分析外，他们还进行了临床亚组分析。

参考文献

[1]Linkage Disequilibrium Mapping of Schizophrenia Susceptibility to the CAPON Region of Chromosome 1q22[J].Linda M.Brzustowicz,Jaime Simone,Paria Mohseni,Jared E.Hayter,Kathleen A.Hodgkinson,Eva W.C.Chow,Anne S.Bassett.The American Journal of Human Genetics.2004(5)

[2]Lesion Progression in apoE-Deficient Mice:Implication of Chemokines and Effect of the AT1 Angiotensin II Receptor Antagonist Irbesartan[J].Geneviève Martin,Frédérique Dol,Anne-Marie Marés,Vincent Berezowski,Bart Staels,Dean W.Hum,Paul Schaeffer,Jean-Marc Herbert.Journal of Cardiovascular Pharmacology.2004(2)

[3]Genes for schizophrenia?Recent findings and their pathophysiological implications[J].Paul J Harrison,Michael J Owen.The Lancet.2003(9355)

[4]Polymorphisms at the G72/G30 Gene Locus,on 13q33,Are Associated with Bipolar Disorder in Two Independent Pedigree Series*[J].Eiji Hattori,Chunyu Liu,Judith A.Badner,Tom I.Bonner,Susan L.Christian,Manjula Maheshwari,Sevilla D.Detera-Wadleigh,Richard A.Gibbs,Elliot S.Gershon.The American Journal of Human Genetics.2003(5)

[5]胡颖.人类染色体13q32区域精神分裂症相关基因的遗传学研究[D].吉林大学,2004.