胚胎细胞凋亡与Caspase-3的关系是什么? ¹

细胞凋亡 (apoptosis) 是细胞为维持内环境稳定，更好地适应生存环境而主动形成的一种自我死亡过程，它涉及一系列基因的激活、表达及调控等作用。哺乳动物附植前的胚胎就可以观察到细胞凋亡的发生，胚胎细胞的凋亡有利于胚胎去除发育异常的细胞，但超出某一程度的凋亡不利于胚胎的发育。

研究着床前胚胎细胞的凋亡将有助于正确理解胚胎的发育过程，改进体外培养体系，提高胚胎质量，解决哺乳动物胚胎流产率高的问题。Caspase家族能够启动和维持细胞凋亡，其中Caspase-3是该细胞凋亡通路下游最重要的凋亡蛋白酶，其表达量直接反映细胞凋亡程度。

Caspase-3是位于哺乳动物细胞凋亡通路下游关键的死亡蛋白酶。正常情况下，胞质中的Caspase-3以无活性的酶原形存在，细胞凋亡信号的出现可导致Caspase-3裂解、活化，活化的Caspase-3又进一步导致蛋白酶级联切割放大，最终使细胞走向死亡。

Caspase-3的激活需要从没有活性的全长Caspase-3(35kD)，在Asp28和Ser29之间及Asp175和Ser176之间进行剪切，产生有活性的17kD肽段。Caspase-3抗体可以识别全长的Caspase-3(35kD)，也可以识别Caspase-3被剪切后产生的17kD片断，而且不与其他Caspase家族蛋白有交叉反应。

如何应用Caspase-3抗体进行细胞凋亡检测？

Caspase-3抗体可用于制备AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒。所述试剂盒包括：0.6-0.8%BSA的PBS缓冲液，2.5-4%多聚甲醛的PBS缓冲液，含0.6-0.8%Triton-X-100和0.06-0.08%吐温40的PBS缓冲液，兔抗caspase-3抗体，带有Alexa-Fluor488绿色荧光素标记的山羊抗兔IgG二抗，18-22μM-DAPI的PBS缓冲液。

所述兔抗caspase-3抗体是用合成的caspase-3蛋白中靠近Asp175的氨基末端残基的多肽抗原免疫兔子获得的多克隆抗体；兔抗caspase-3抗体按1:600的体积比稀释于封闭液中。所述山羊抗兔IgG二抗按1:600的体积比稀释于封闭液中；其中，所述封闭液为含10%山羊血清和0.06-0.08%吐温40的PBS液。上述试剂盒能对凋亡细胞进行准确定性和定量检测，灵敏度高、特异性强，操作简单，重复性好，效率高。

主要参考资料

[1] 孙缦利, 邓海峰, 马玲, 等. 美满霉素对阿尔茨海默病大鼠前额叶皮层 CRMP-2 和 Caspase-3 表达的影响[J]. 中国老年学杂志, 2018, 38(17): 4236-4239.

[2] CN201610432720.4 AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒