本试剂盒适用于从血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA,并可用于提取其他液体样品和微量样品。它具有以下特点:
1. 高回收率:回收率可达90%以上,高于大多数基于离心柱的提取方法。
2. 高灵敏度:最终灵敏度可达到50~100拷贝/ml。
3. 一管式操作:整个操作过程在室温下完成,无需使用离心柱。
4. 安全无毒:不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
5. 处理量大:最多可处理1.5 ml液体病毒样品。
提取的病毒RNA在常温下运输,4℃保存。
1. 自备材料:小型高速离心机、离心管、异丙醇、70%乙醇等。
2. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD,不能是肝素。使用ACD时,样品会被稀释,得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
3. 用于制备血浆的全血在2~25°C放置的时间不能超过6小时,血浆可以在2~8°C或更低温度下运输和保存。
1. 在每管中加入0.6 ml Buffer Rlysis-VG溶液。
2. 快速震荡样品几秒,再短暂离心,取0.2 ml液体样品加入到已经装有0.6 ml Buffer Rlysis-VG溶液的离心管中。
3. 加入正负对照样品。
4. 室温放置10分钟。
5. 加入异丙醇,离心至少15分钟。
6. 移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀。
7. 加入70%乙醇,离心5分钟。
8. 移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀。
9. 移弃残留液体(70%乙醇)。
10. 加入Rnase-free水,溶解RNA沉淀。
11. 样品可以直接用于RT-PCR,也可保存于-70°C。
[1] 病毒 RNA 抽提纯化试剂盒产品说明书